表皮生長因子受體在體外循環(huán)急性肺損傷中的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　體外循環(huán)(CPB)已經(jīng)成為心臟外科手術(shù)中一項(xiàng)非常重要的關(guān)鍵技術(shù)。體外循環(huán)(CPB)對心臟手術(shù)的發(fā)展帶來了革命性的變化，同時(shí)也很大程度上改善患者的預(yù)后。但是，CPB術(shù)后本身也會(huì)給病人造成一些不可避免的急性肺損傷，導(dǎo)致一系列并發(fā)癥的發(fā)生。為此，設(shè)計(jì)以下實(shí)驗(yàn)，探究體外循環(huán)術(shù)后急性肺損傷的機(jī)制以及可能的治療方案。
　　材料與方法：
　　1.體外循環(huán)模型的建立:沿兔胸骨正中開胸，分別經(jīng)主動(dòng)脈插入6F動(dòng)脈導(dǎo)管，導(dǎo)管末端

2、沿降主動(dòng)脈方向;經(jīng)右心房插入靜脈引流管。轉(zhuǎn)流開始，阻斷鉗完全夾閉主動(dòng)脈、肺動(dòng)脈，灌注Thomas液，維持肛溫33℃。心臟停搏30min后，開放主、肺動(dòng)脈，終止體外轉(zhuǎn)流，中和肝素，監(jiān)測生命體征，觀察4小時(shí)。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:新西蘭兔隨機(jī)進(jìn)行分為4組:CTRL組（術(shù)前3小時(shí)口服15％Captisol6.25ml/Kg，僅開胸不進(jìn)行體外循環(huán)手術(shù)）、Erlotinib組（術(shù)前3小時(shí)口服溶于15％Captisol的Erlotinib100

3、mg/Kg，僅開胸不進(jìn)行體外循環(huán)手術(shù)）、CPB組（術(shù)前3小時(shí)口服15％Captisol6.25ml/Kg，開胸進(jìn)行體外循環(huán)手術(shù)）、CPB+Erlotinib組（術(shù)前3小時(shí)口服溶于15％Captisol的Erlotinib100mg/Kg，開胸進(jìn)行體外循環(huán)手術(shù)）。
　　3.ELISA法檢測血清TNF-α的表達(dá):使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清TNF-α表達(dá)水平。
　　4.免疫熒光檢測兔肺組織PARP-1的表達(dá)水平:收集

4、樣本，使用免疫熒光法檢測術(shù)后肺組織PARP-1的表達(dá)水平。
　　5.Western blot檢測各組肺組織ERK1/2、P38蛋白磷酸化水平:收集術(shù)后樣本，使用Western blot法檢測組織ERK1/2、P38蛋白磷酸化水平。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。不同時(shí)間點(diǎn)采用重復(fù)測量;兩組比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);多組比較采用單因素方差分析(one

5、 way ANVOA)，比較組間差異時(shí)，方差齊用LSD檢驗(yàn)，方差不齊用Dunnett'sT3檢驗(yàn)。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。作圖使用GraphPad Prism5.0作圖軟件。
　　結(jié)果：
　　1.體外循環(huán)術(shù)對肺泡上皮細(xì)胞死亡方式的影響
　　與CTRL相比，CPB肺泡上皮細(xì)胞PARP-1的表達(dá)水平明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。
　　2.EGFR抑制劑對體外循環(huán)誘導(dǎo)的TNF-α生成的影響
　　

6、收集各組術(shù)后4h動(dòng)脈血，使用酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA檢測血清中TNF-α的表達(dá)水平。與CTRL組相比，CPB組、CPB+Erlotinib組動(dòng)脈血液中TNF-α的表達(dá)水平明顯升高(p＜0.001)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CTRL組與Erlotinib組相比，TNF-α的表達(dá)水平無明顯差異(p=0.974)。與CPB組相比，CPB+Erlotinib組TNF-α的表達(dá)水平顯著降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。
　　3.EGFR抑制劑對

7、ERK1/2和P38蛋白磷酸化的影響
　　與CTRL組相比，CPB組與CPB+Erlotinib組ERK1/2的磷酸化水平顯著升高(p＜0.001);而與Erlotinib組，ERK1/2蛋白的磷酸化水平無明顯差異(p=0.656)。與CPB組相比，CPB+Erlotinib組ERK1/2蛋白的磷酸化水平明顯被降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。與CTRL組相比，CPB組(p＜0.001)與CPB+Erlotinib組(p＜

8、0.05)P38的磷酸化水平顯著升高;而Erlotinib組，P38蛋白的磷酸化水平無明顯差異(p=0.277)。與CPB組相比，CPB+Erlotinib組P38蛋白的磷酸化水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、體外循環(huán)術(shù)后TNF-α水平明顯升高，大量肺泡上皮細(xì)胞發(fā)生Parthanatos。
　　2、表皮生長因子受體EGFR參與體外循環(huán)誘導(dǎo)的TNF-α生成。
　　3、體外循環(huán)導(dǎo)致