表皮生長因子受體在可溶性鋅化合物致大鼠急性呼吸道炎癥中的作用.pdf

1、表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor,EGFR)是表皮生長因子受體家族成員之一,是原癌基因c-erbB1的表達產(chǎn)物,分子量大約170kd。EGFR可通過直接和間接兩條途徑被激活?；罨腅GFR可通過下游信號導(dǎo)通路激活基因轉(zhuǎn)錄因子,進而啟動細胞核內(nèi)有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄、調(diào)節(jié)蛋白合成、細胞分裂、增殖和分化和炎癥性反應(yīng)等。
　　 鋅也普遍存在于空氣微細顆粒污染物中。鋅在顆粒物所含多種金屬中所占比

2、例最高。當前的主導(dǎo)觀點認為空氣微細顆粒物的呼吸道毒性與其化學(xué)成分,尤其與某些可溶性金屬離子相關(guān)。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),吸入含鋅顆粒物或者氣管滴注鋅鹽溶液均能引起呼吸道炎癥。體外研究顯示,外源鋅離子可激活細胞內(nèi)多個信號傳導(dǎo)通路,如表皮生長因子受體(EGFR)等。EGFR磷酸化啟動了呼吸道上皮細胞信號通路,在組織修復(fù)及正常的細胞的動態(tài)平衡過程中起到重要作用。但是EGFR在鋅離子致呼吸道損傷過程中的作用還不清楚。
　　 研究目的：
　　

3、 探討鋅離子對大鼠呼吸道EGFR表達及活化的影響以及EGFR在鋅離子誘導(dǎo)呼吸道炎癥過程的作用。
　　 材料與方法：
　　 1.復(fù)制動物炎癥模型。清潔級雄性Wistar大鼠30只采用隨機分為6組,每組5只,支氣管灌注法分別給予PBS和硫酸鋅溶液各3組,分別于灌注后4 h、8 h、24 h處死。
　　 2.EGFR信號傳導(dǎo)通路阻斷實驗。清潔級雄性Wistar大鼠20只隨機分為4組,每組5只。用DMSO或PD1530

4、35溶液預(yù)灌注各2組,約30min；經(jīng)過預(yù)灌注處理的2組大鼠分別灌注PBS或硫酸鋅溶液,于灌注后8 h處死。
　　 3.觀察指標。收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF),使用ELISA試劑盒檢測IL-8和LDH含量；考馬斯亮藍法檢測總蛋白滲出情況；計數(shù)滲出炎癥細胞；肺組織做病理切片觀察炎癥細胞浸潤情況。Western blot檢測EGFR表達及Tyr1068活化情況。
　

5、　 4.采用統(tǒng)計軟件SPSS12.0進行數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)以(x)±s表示。應(yīng)用2×3析因設(shè)計方差分析,比較不同灌注液及時間對大鼠急性呼吸道炎癥的影響,篩選最佳時間；應(yīng)用2×2析因設(shè)計方差分析,比較預(yù)灌注液和灌注液的主效應(yīng)及其交互作用。檢驗水準α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.鋅離子能引起大鼠呼吸道炎癥。灌注硫酸鋅8 h后BALF白細胞計數(shù)含量為3.44×109／L；灌注PBS8 h后BALF白細胞計數(shù)為1.89×1

6、09／L。不同灌注液作用后大鼠BALF白細胞計數(shù)(F=12.149,P<0.01)不同。灌注硫酸鋅4 h、8 h和24 h后白細胞計數(shù)分別為2.01×109／L、3.44×109／L和1.03×109／L。不同時間點白細胞計數(shù)(F=29.569,P<0.01)也不同。
　　 2.PD153035能夠抑制鋅離子引起的呼吸道炎癥。不同預(yù)灌注液作用后大鼠白細胞計數(shù)、總蛋白、LDH和IL-8含量(F=37.872,26.212、28.7

7、41和24.347,P<0.01)不同。PD153035預(yù)灌注組中硫酸鋅所致炎癥反應(yīng)較DMSO組中硫酸鋅的作用明顯減弱；PD153035硫酸鋅組EGFR表達量(271.818)及Tyr1068磷酸化(239.676)較DMSO組明顯減少(436.320和428.360)。
　　 結(jié)論：
　　 硫酸鋅溶液能夠引起大鼠呼吸道急性炎癥；硫酸鋅可致大鼠呼吸道細胞內(nèi)EGFR磷酸化；PD153035可明顯減弱硫酸鋅所致的EGFR磷酸