鹽芥激活標簽突變體庫的建立及過量表達YAP1對擬南芥耐鹽性的影響.pdf

1、山東師范大學博士學位論文鹽芥激活標簽突變體庫的建立及過量表達YAP1對擬南芥耐鹽性的影響姓名：趙吉強申請學位級別：博士專業(yè)：植物學指導教師：趙彥修張慧20081010山東師范大學博士學位論文氧化脅迫相關的基因的表達，在抗氧化脅迫反應中起著重要的作用。但是YAPl基因在高等植物中異源表達及對其影響還未見報道，因此YAPl基因在擬南芥中過量表達，對研究細胞抗氧化脅迫能力及運用基因工程手段有效地提高植物的抗逆性具有重要意義。本論文的主要目的是

2、建立耐鹽模式植物鹽芥的激活標簽突變體庫，為發(fā)掘利用鹽芥的耐鹽基因，揭示鹽芥耐鹽的分子機理奠定基礎，同時研究了酵母轉錄因子YAPl基因在擬南芥中過量表達的功能。主要結果如下：1鹽芥激活標記突變體庫的建立以耐鹽模式植物鹽芥為實驗材料，通過農桿菌介導的花浸染法將激活標記載體pSKl015導入鹽芥基因組，試圖建立一定規(guī)模的鹽芥激活標記突變體庫。主要結果如下：(1)通過農桿菌介導的花侵染法，利用激活標記載體pSKl015對鹽芥進行了遺傳轉化，共獲

3、得轉化To代種子10009左右，通過除草劑篩選，共獲得抗性苗約2000株。(2)通過對所獲得的鹽芥除草劑抗性苗隨機取約800株進行bar基因的PCR檢測，朝性率在85％以上，證明采用除草劑對轉化突變體進行篩選是可行的。(3)通過對獲得的2000株激活標記抗性苗，采用TAIL—PCR的方法進行農桿菌TDNA插入鹽芥基因組側翼序列的擴增，并進行測序，得到側翼序列150余條，并進行了相關的序列分析。本實驗的目的是建立飽和的鹽芥激活標記突變體庫

4、，但由于各種因素的限制，所獲得的體變體的數(shù)量還遠遠不夠，大規(guī)模的突變體庫還在構建之中。利用TAIL—PCR進行側翼序列的擴增已獲得初步成功，只是對于PCR產物的測序方法還有待于進一步完善。2、YAPl基因在擬南芥中的過量表達通過RTPCR的方法克隆到YAPl基因，并將其構建到植物表達載體pROKII中，導入農桿菌后，進行植物遺傳轉化，實現(xiàn)其在擬南芥中過量表達，在含30mg／L的卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選獲得純合轉基因株系，自交一代獲得足夠的