SOS1 RNAi對鹽芥耐鹽性的影響.pdf

1、鹽脅迫下，植物細胞的離子均衡受到破壞，胞質中積累過多的Na+，對植物細胞的代謝產生毒害。植物細胞為適應脅迫環(huán)境，一方面積累可溶性有機物質；另一方面，則通過Na+外排或者區(qū)隔化、并調整K+/Na+比率的機制來消除Na+的毒害。擬南芥細胞內控制Na+外排的基因SOS1及離子區(qū)隔化基因AtNHX1均已克隆，SOS1及AtNHX1在擬南芥中的過量表達顯著提高了轉基因植株的耐鹽性。在擬南芥中，SOS1及SOS2、SOS3所組成的SOS信號通路的調

2、控機制業(yè)已得到闡明，研究表明SOS信號通路在調控離子均衡和植物耐鹽性中發(fā)揮重要作用。作為擬南芥近緣的鹽生植物鹽芥，短時間內能耐受高達500mMNaCl的沖擊，在鹽適應前后既不產生鹽腺也沒有復雜的形態(tài)上的變化，表明其耐鹽性很大程度上源于基本的生理和生化機制。因此在鹽芥中沉默SOS1基因進行研究，對揭示鹽生植物耐鹽性的基礎具有重要意義。 本實驗將鹽芥編碼Na+/H+逆向轉運蛋白的SOS1基因721bp的片斷反向重復構建到基因沉默載體

3、pGSA1252中，導入農桿菌后，進行植物遺傳轉化，實現(xiàn)鹽芥中SOS1的轉錄水平的下降。在用濃度為50ppm的Glufosinateammonium篩選后，獲得轉基因株系，自交一代獲得足夠的轉基因種子后，對其進行了分子生物學的驗證及生理指標的檢驗。轉基因植株的分子生物學檢測如下： 1.各轉基因株系中，均能通過PCR擴增出Bar基因的500bp的特異性條帶，表明T—DNA已經攜帶Bar基因及SOS1基因片斷整合進鹽芥基因組中。

4、 2.RealtimePCR結果顯示，轉基因株系在NaCl處理條件下SOS1轉錄水平會發(fā)生不同程度的下降。進一步說明SOS1基因的反向重復片段整合到擬南芥的基因組后已正常轉錄，并引起了SOS1RNA的降解。 耐鹽生理指標分析表明： 1.在含不同濃度NaCl(0-300mmol/L)的培養(yǎng)基上，SOS1基因的沉默降低了轉基因鹽芥的耐鹽性。 2.通過比較各個轉基因株系之間耐鹽性的差異及SOS1轉錄的水平，發(fā)現(xiàn)SO

5、S1轉錄水平降低越多，鹽芥的耐鹽性越差。 3.在用不同濃度的NaCl(0-400mmol/L)處理后，結果表明轉基因植株長勢明顯差于對照。 4.Na+、K+含量測定表明，0，200mmol/LNaCl處理下轉基因根和地上部分Na+的積累顯著高于對照，300，400mmol/LLNaCl處理下則差異不是很明顯。0-400mmol/LNaCl處理后，轉基因植株和對照中，根和地上部分K+含量均下降，但差異不明顯。 5.