中國青島文昌魚Bam32、TAPP基因的發(fā)現(xiàn)及其相關性質研究.pdf

1、本文綜合應用現(xiàn)代分子生物學方法與技術，從核酸水平和蛋白質水平，對我國海洋珍稀物種青島文昌魚Bam32、TAPP基因進行較為系統(tǒng)的研究。以期闡明Bam32、TAPP在免疫系統(tǒng)進化過程中和其它生命活動中的重要性和特殊性。 通過對青島文昌魚卵巢cDNA表達文庫的序列測定和生物信息學分析，獲得了編碼文昌魚TAPP的全長cDNA序列。通過5'-Race的方法獲得了文昌魚Bam32全長cDNA序列。文昌魚Bam32和TAPP具有一些共同的特

2、征，包括：都是小分子，缺乏酶活位點，C端都有一個PH結構域。與Bam32不同的是，TAPP的N端是一個PH結構域，而Bam32的N端是一個SH2結構域。 本文進行了Southernblot和基因組擴增并測序。結果顯示文昌魚Bam32在基因組上出現(xiàn)了2個拷貝，具有8個內含子；而文昌魚TAPP則有4個拷貝，具有10個內含子。文昌魚的TAPP基因除了不在脊索中表達外，在鰓、消化道、卵巢和肌肉都有表達；文昌魚Bam32只在鰓、消化道和卵

3、巢中表達。考慮到Bam32在免疫系統(tǒng)中的特殊作用以及文昌魚特殊的進化地位，我們的實驗結果暗示文昌魚的鰓和消化道很可能是原始的淋巴樣組織。通過RealtimePCR，發(fā)現(xiàn)在成魚急性感染刺激后，文昌魚Bam32、TAPP的轉錄水平沒有發(fā)生顯著的變化，似乎和炎癥反應沒有直接關系。 最后，本文還通過體外原核融合表達得到了文昌魚Bam32、TAPP重組蛋白，純化并驗證了文昌魚Bam32、TAPP體外特異結合PtdIns(3,4)P2的能力