青島文昌魚早期發(fā)育相關(guān)基因sfy1、hedgehog、MLC-alk的研究.pdf

1、摘要青島文昌魚早期發(fā)育相關(guān)基因sfyl、hedgehog和LC嚆Ik的研究摘要／(文昌魚(An曲joⅪ由屬頭索動物(a穢捌＆kr出衄)，被認(rèn)為是葫惰的與脊椎動物最接近的物種，是研究動物進(jìn)化和胚胎發(fā)育的典型材料。由于分布有限、材料稀少、取材困難，關(guān)于文昌魚發(fā)育分子機(jī)制的研究報(bào)道相對較少，且絕大多數(shù)是以佛羅里達(dá)文昌魚(＆四d面s2跏懈膨r‘婦)為a才爿啦我國是文昌魚的主要產(chǎn)地之一，見于青島和廈門的我國特有物種白氏文昌魚(西留d庇喲，，鹼睫比

2、k吶與佛羅里達(dá)文昌魚有明顯的差晃從外卿看，前者平均體長僅4c皿而后者長達(dá)10cm，發(fā)育過程也有一些不同之處。但迄今國內(nèi)對其發(fā)育調(diào)控基因的研究尚是空白。尹y一本工作構(gòu)建了青島文昌魚回忉d面棚施搠研動趔腳刪受精后18小時(shí)神經(jīng)胚的cDNA文庫，克隆了文昌魚新基因s分l和hehog基NN全“長cDNA并研究了它們的mRNA在早期發(fā)育中的表達(dá)圖式此外還克隆了青島文昌魚堿陛肌球蛋白輕鏈MLCaIk基因的全長cEIN～為進(jìn)一步研究文昌魚的發(fā)育機(jī)制提供

3、了重要資料。／一為了克隆在文昌魚早期發(fā)育中表達(dá)的基因并研究這些基因的功能，構(gòu)建了青島文昌魚黼18小時(shí)神經(jīng)胚的黜克庫。提取青島文昌魚18小時(shí)神經(jīng)胚衄№以№I姆㈣18為撇反轉(zhuǎn)錄合成ccNA，在雙鏈cDl認(rèn)的5’蝴coRI銜接頭，與帶有NotI和F竹oRI突出末端并經(jīng)過5’端脫磷的入D刪lN礬／E∞Ⅺ／CIP劑kDNA進(jìn)行連接，經(jīng)體外包裝和感染NM522宿主菌，得到重組噬菌體克隆庫容量為5106pfu／BgcDNA。摘要Slyl蛋白的特性，結(jié)

4、果表明Slyl蛋白是分尋量為373toa、等電點(diǎn)為931、富含堿性氨基酸的蛋白質(zhì)，可能定位于核內(nèi)，有潛在的肉豆蔻?；稽c(diǎn)、糖基化位點(diǎn)和多種磷酸化位點(diǎn)存在。從這_基因的基元(motif)分析結(jié)果和表達(dá)圖式看，它可能通過磷酸似去磷酸化的修飾參與文昌魚呼吸器官和消化器官的發(fā)生。三青島文昌魚l】。d醇】09基因全長cDNA的克隆及淇mRNA在早期發(fā)育中表趙圖式的研究hedge嘴家族基因編碼一類分泌陛信號分子’在果蠅的體節(jié)和成蟲盤的圖式形成、脊

5、椎動物的神經(jīng)管、體節(jié)和肢、以及精巢和軟骨的發(fā)育中具有重雪附凋。本】作首次克隆了青島文昌魚hed酣x毽基因全長eDNA，并研究了其mRNA在早期發(fā)育中的表達(dá)圖式。1以青島文昌魚神經(jīng)胚rnRNA為模板，通過3’RACE克隆了長約2500bp含3’端poly～尾的he電蜒漲序列。在已得到的序列中設(shè)計(jì)引物，又進(jìn)行了2次5’RACE反應(yīng)，分別得到長約400bp和800bp的I】e電疊x培5’端序列。2將E述各個(gè)片段拼接起來，得到長度為3540br

6、的全長l鹼龜昏鹋cDNA序列。這_序列含有完整的開放閱讀框，編碼415個(gè)氨基酸。已登錄于GenBank，登錄號為：AF324065。3由該cDNA序列演繹的hedge曜蛋白與各種生物的hedgdaog蛋白都有較高的相同性，與脊椎動物中三種類型的b。電幽og蛋白一一s№、Dhh、Ihh有近似的相同性，似不應(yīng)歸類于這三種類型中的任何—種。這一結(jié)果傾向于支摶青島文昌魚只具有—個(gè)1edgeog同源基因。這為證明hedge聰基因陪增發(fā)生在脊椎動物