瘦素（Leptin）在小鼠胚胎圍著床期的動態(tài)表達.pdf

1、在妊娠過程中，胚胎著床是一個重要環(huán)節(jié)。胚胎著床是受精卵發(fā)育至脫帶囊胚期后對子宮內(nèi)膜的粘附入侵的一個復雜生理過程。它包括胚泡的定位、粘附及植入。胚胎著床的關鍵步驟是胚胎滋養(yǎng)層細胞對子宮內(nèi)膜的侵入，與母體成份共同形成胎盤。滋養(yǎng)層細胞與子宮內(nèi)膜上皮細胞和基質細胞之間、上皮細胞和基質細胞之間的“對話”，精確調節(jié)滋養(yǎng)層細胞的增殖分化和子宮內(nèi)膜的蛻膜化，從而保證滋養(yǎng)層細胞(Trophectoderm,TE)的適度侵入[1]。人類胚胎著床發(fā)生在促黃體

2、素(Luteinizinghormone，LH)峰之后大約7～11天(day,d)，小鼠胚胎的“著床窗”在妊娠4～5d，持續(xù)24h左右，受到多種激素、生長因子及粘附分子等因素的調控。近年來研究發(fā)現(xiàn)，剔除leptin基因的ob/ob小鼠由于缺乏功能性leptin而導致肥胖和不育，給予外源性leptin又能恢復其生育能力，但在胚胎發(fā)育第4d前停止給予leptin，妊娠又將中斷[2,3]。因此體內(nèi)一定水平的leptin是保證生殖功能正常的前提

3、，過高或過低都可能破壞這種平衡，影響生殖功能，甚至導致不孕。 為了更好地理解leptin在胚胎圍著床期中的作用，我們采用了RT-PCR、免疫組化和免疫熒光等分子生物學技術來探討胚胎圍著床期leptin在子宮組織和胚胎中的表達規(guī)律，旨在為胚胎著床機理提供新的理論依據(jù)。 試驗一目的：探討leptin在妊娠早期小鼠子宮中的表達規(guī)律。方法：性成熟雌性NIH小鼠用孕馬血清促性腺激素(pregnantmareserumgonadot

4、rophin，PMSG)和絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotrophin，hCG)進行超排卵，與成熟雄鼠交配，在妊娠1d-6d分別脫臼處死小鼠取其子宮，用DMEM/F12培養(yǎng)液充分沖洗子宮，然后進行以下試驗：1.分別提取總RNA，檢測小鼠子宮以及胚胎著床點和非著床點的子宮leptinmRNA表達規(guī)律；2.分別用10﹪福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，然后進行免疫組織化學試驗，檢測leptin蛋白的表達規(guī)律。結果：妊

5、娠1-6d小鼠子宮均有l(wèi)eptinmRNA和蛋白表達，leptin蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮；LeptinmRNA水平呈現(xiàn)規(guī)律性表達，1d、2d表達微弱，3d開始增強，4d達到高峰，5d、6d仍維持在一定水平；無論妊娠5d或6d，著床點leptinmRNA水平比非著床點顯著增強。結論：子宮組織表達的leptin與胚胎發(fā)育、胚胎著床的進程有密切關系。 試驗二目的：探討leptin在圍著床期胚胎中的表達規(guī)律。方法：性成熟雌性NIH

6、小鼠用PMSG和hCG進行超排卵，與成熟雄鼠交配，分別在妊娠1d-3d上午脫臼處死小鼠取其輸卵管，沖取2-cell、4-cell、8-cell；在妊娠4d取其子宮角，沖取桑椹胚、囊胚。保存于-80℃，然后進行以下試驗：1.分別提取總RNA，檢測胚胎中l(wèi)eptinmRNA表達情況；2.試驗當天沖取擴展囊胚進行免疫熒光試驗，在激光共聚焦顯微鏡下觀察leptin蛋白的表達和分布情況。結果：leptinmRNA和蛋白僅在囊胚期特異性表達，其余各