DEK參與小鼠胚胎著床.pdf

1、目的：妊娠是一個復(fù)雜的系列事件，包括受精、胚胎粘附植入、胚胎生長發(fā)育和胎兒分娩等過程。在應(yīng)對胚胎粘附植入時，母體發(fā)生最重要的變化便是子宮內(nèi)膜蛻膜化，但其調(diào)控機制尚未闡明。DEK是一個 DNA結(jié)合蛋白，過去對于它的研究主要集中在腫瘤方面，認為DEK促進細胞增殖，但在生殖系統(tǒng)中卻從未有過研究。課題組前期采用蛋白質(zhì)同位素相對標記與絕對定量技術(shù)進行的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)DEK在早孕小鼠胚胎著床點子宮內(nèi)膜的表達水平顯著高于著床旁子宮內(nèi)膜組織。因

2、此，本項目旨在進一步探討DEK對子宮內(nèi)膜的影響以及在胚胎著床中的作用。
　　方法：（1）分別構(gòu)建真孕、假孕和人工誘導(dǎo)蛻膜化小鼠模型，并采用實時熒光定量 PCR、原位雜交、免疫組織化學(xué)和蛋白印跡技術(shù)檢測DEK mRNA和蛋白的表達。（2）原代分離小鼠基質(zhì)細胞并誘導(dǎo)其蛻膜化，進一步采用siRNA抑制DEK表達，并檢測細胞增殖、凋亡、分化和核損傷情況，以此探索DEK在調(diào)控基質(zhì)細胞蛻膜化中的作用。（3）孕鼠妊娠第三天體內(nèi)宮角注射DEK s

3、iRNA，于妊娠第八天計數(shù)植入胚胎數(shù)量，以探討DEK對胚胎著床的影響。
　　結(jié)果：（1）妊娠早期真孕和人工誘導(dǎo)蛻膜化小鼠子宮內(nèi)膜中，DEK的表達模式具有時空差異性。在真孕模型中，DEK蛋白在胚胎著床后表達量開始逐天升高，且著床點表達高于著床旁；假孕則沒有高峰出現(xiàn)；人工誘導(dǎo)蛻膜化中蛻膜組比未蛻膜組表達量高。DEK mRNA在真孕中胚胎著床后表達量也逐天升高，但著床點表達量低于著床旁；假孕也沒有高峰出現(xiàn)；人工誘導(dǎo)蛻膜化中蛻膜組比未蛻膜