小鼠圍著床期子宮中精氨酸琥珀酸合成酶1的表達(dá)調(diào)節(jié)和功能.pdf

1、精氨酸琥珀酸合成酶（Argininosuccinatesynthetase1，Ass1）能夠催化瓜氨酸(L-Citrulline)和天冬氨酸(L-Aspartate)形成精氨琥珀酸，然后在精氨琥珀酸裂解酶（Argininosuccinatelyase，Asl）的作用下，生成精氨酸（L-Arginine）和延胡索酸。由于Asl的表達(dá)量恒定，因此Ass1是生成精氨酸的限速酶。本實(shí)驗(yàn)利用原位雜交和Real-timePCR檢測了Ass1和Asl

2、在圍著床期小鼠子宮中的表達(dá)，并利用假孕和人工誘導(dǎo)蛻膜化等模型研究了Ass1的表達(dá)及其調(diào)節(jié)，同時(shí)檢測了在妊娠D4和D8小鼠子宮內(nèi)膜和血液中的精氨酸含量。在體外細(xì)胞培養(yǎng)中，探討了cAMP對Ass1的調(diào)節(jié)機(jī)制，以及Ass1和精氨酸水平對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖和蛻膜化的影響。利用Ass1特異性抑制劑MDLA，我們研究了Ass1在胚胎著床及蛻膜化中的作用。
　　在小鼠早期妊娠(D1-D4)的子宮中，Ass1和Asl沒有表達(dá);在妊娠第5天，

3、Ass1和Asl均在著床位點(diǎn)處的基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。隨著蛻膜化的進(jìn)行(D5-D8)，Ass1和Asl的表達(dá)從初級蛻膜區(qū)逐漸擴(kuò)展到次級蛻膜區(qū)。在人工誘導(dǎo)蛻膜化組織中，均可檢測到Ass1和Asl表達(dá)。但在假孕和延遲著床的小鼠子宮中檢測不到信號，延遲著床被激活后;Ass1和Asl主要定位于著床位點(diǎn)環(huán)繞胚胎的基質(zhì)細(xì)胞中，說明Ass1和Asl的表達(dá)受胚胎調(diào)節(jié)。對妊娠D4小鼠的子宮內(nèi)膜和D8的著床點(diǎn)子宮內(nèi)膜組織以及血清分析發(fā)現(xiàn)，在妊娠D8天的著床點(diǎn)子宮

4、和血清中精氨酸的量均增加。
　　體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，cAMP通過激活PKA信號通路，Creb蛋白磷酸化后可結(jié)合到Ass1啟動子的Cre結(jié)合元件區(qū)，調(diào)控Ass1的轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)精氨酸的水平。干涉Creb后，能明顯下調(diào)Ass1和蛻膜化標(biāo)志分子Dtprp的表達(dá)。干涉Ass1或者使用Ass1的抑制劑MDLA也能明顯下調(diào)Dtprp的表達(dá)。過表達(dá)Ass1和Asl可以上調(diào)Dtprp的表達(dá)。使用Ass1的產(chǎn)物精氨酸處理基質(zhì)細(xì)胞時(shí)，低

5、濃度的精氨酸對Ass1、Asl、Dtprp和細(xì)胞增殖沒有影響，高濃度的精氨酸可抑制Ass1和Asl表達(dá)水平，但顯著促進(jìn)Dtprp的表達(dá)，并且明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖。從妊娠D4到D6注射Ass1的特異性抑制劑MDLA，能顯著抑制蛻膜化。
　　這些結(jié)果表明，Ass1在體內(nèi)和體外小鼠基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化過程中均有表達(dá)，在基質(zhì)細(xì)胞的增殖和蛻膜化過程中發(fā)揮重要作用。cAMP通過PKA激酶調(diào)節(jié)Ass1的表達(dá)水平。精氨酸水平在蛻膜組織中升高，高濃度的精氨酸