膽固醇配基色譜在蛋白質(zhì)復(fù)性中的應(yīng)用.pdf

1、色譜復(fù)性是一種非常有效的蛋白質(zhì)復(fù)性方法，尺寸排阻色譜、離子交換色譜、親和色譜已經(jīng)成功應(yīng)用于很多蛋白質(zhì)的復(fù)性中。原則上疏水作用介質(zhì)能夠捕捉具有暴露疏水部位的變性蛋白質(zhì)和折疊中間體，從而抑制聚集發(fā)生，也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)復(fù)性。但商業(yè)化的疏水介質(zhì)一般是針對(duì)于蛋白質(zhì)分離而開(kāi)發(fā)的，其疏水作用較強(qiáng)，不利于蛋白質(zhì)的復(fù)性。因此有必要開(kāi)發(fā)一種具有適當(dāng)疏水強(qiáng)度的色譜介質(zhì)，在抑制分子間聚集作用的同時(shí)又不會(huì)影響復(fù)性過(guò)程中的疏水塌縮，更好地實(shí)現(xiàn)復(fù)性。 本

2、文以三聚氯氰為連接臂，通過(guò)兩步法將膽固醇修飾到Sepharose CL-6B介質(zhì)上，合成出一種新型的疏水介質(zhì)，構(gòu)建了膽固醇配基色譜。在此基礎(chǔ)上，選取還原變性的溶菌酶(Lys)為目標(biāo)蛋白質(zhì)，考察了稀釋復(fù)性、膽固醇配基色譜穿過(guò)復(fù)性和吸附-洗脫復(fù)性這三種不同方法對(duì)復(fù)性效果的影響，研究結(jié)果表明：當(dāng)上樣量為0.25 mg Lys/ml介質(zhì)時(shí)，采用吸附-洗脫方法可最終得到96.3％的蛋白收率和91.4％的活性收率，大大高于其它兩種方法。圓二色光譜、