橫向交變電場(chǎng)中的蛋白質(zhì)電色譜研究.pdf

1、本文系統(tǒng)介紹了制備型體積排阻電色譜和離子交換電色譜中一種新型的橫向交變外電場(chǎng)引入技術(shù),電場(chǎng)施加在色譜柱的橫向,也就是電力線垂直于柱內(nèi)的壓力流線.因此,在色譜柱的軸向,液相由壓力驅(qū)動(dòng)；在色譜柱的橫向,荷電溶質(zhì)產(chǎn)生橫向的電動(dòng)傳遞.本文主要研究其在蛋白質(zhì)色譜分離中的應(yīng)用.在體積排阻電色譜(PSEEC)中,系統(tǒng)研究了蛋白質(zhì)(BSA、Myo)在SephadexG-75中的保留行為.電場(chǎng)、緩沖液等實(shí)驗(yàn)條件都因影響蛋白質(zhì)的電泳遷移而影響其保留行為.荷

2、電蛋白質(zhì)的分配系數(shù)隨電場(chǎng)強(qiáng)度的增大而增大,也隨緩沖液pH和蛋白質(zhì)等電點(diǎn)之間差異的增大而增大.對(duì)于被凝膠排除的生物大分子(如BSA),濃差極化現(xiàn)象是其分配系數(shù)增大的主要原因；對(duì)于凝膠滲透的較小蛋白質(zhì)(如Mvo),除濃差極化外,靜止相內(nèi)的電泳對(duì)流是其分配系數(shù)增大的主要原因. 另外,荷電的蛋白質(zhì)大分子既發(fā)生濃差極化又發(fā)生孔內(nèi)的電泳對(duì)流,使傳質(zhì)現(xiàn)象變得更為復(fù)雜.流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和電場(chǎng)強(qiáng)度等通過(guò)影響蛋白質(zhì)的電泳速度而影響其傳質(zhì)行為.在PS

3、EEC中,實(shí)驗(yàn)研究了不同類(lèi)型的二元蛋白質(zhì)混合物(IgG/BSA、Myo/Lys、BSA/Myo等)和一種三元蛋白質(zhì)混合物(BSA/Myo/Lys)在Sephadex G-75中的分離行為,根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異分離那些在常規(guī)體積排阻色譜(SEC)中無(wú)法分離的蛋白質(zhì)(如IgG/BSA、Myo/Lys)；對(duì)于在SEC中能得到部分分離的蛋白質(zhì)混合物(如BSA/Myo),在PSEEC中可以增大其分離度和提高樣品處理量. 在離子交換電色

4、譜中(PIEEC),利用電動(dòng)傳遞現(xiàn)象(電滲、電泳)來(lái)強(qiáng)化介質(zhì)顆粒間/顆粒孔內(nèi)傳質(zhì).在分別含5.0,12.5mmol/L NaCl的Tris-Glyr緩沖液(pH8.2)中,實(shí)驗(yàn)研究了不同電場(chǎng)強(qiáng)度下BSA在DEAE Sepharose FF上的動(dòng)態(tài)吸附行為,結(jié)果表明蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)吸附容量隨電場(chǎng)強(qiáng)度的增大而線性增大,說(shuō)明離子交換介質(zhì)孔內(nèi)的貫穿電滲流和蛋白質(zhì)的電泳對(duì)流是引起動(dòng)態(tài)吸附容量增大的主要原因.另外,還研究了電流交變周期、流速、柱高等對(duì)動(dòng)