染料親和色譜復(fù)性蛋白質(zhì)新方法的研究及其應(yīng)用.pdf

1、本論文分三部分，第一部分，基于大孔生物材料的染料親和色譜，發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)色譜復(fù)性新技術(shù)；第二部分，基于溶膠-凝膠法，通過氨水溶液簡單處理制備了球形硅膠支載的固定化金屬親和吸附劑；第三部分，基于溶膠-凝膠法，通過氫氧化鈉溶液簡單處理制備了球形硅膠支載的生物吸附劑。
　　 1、基于大孔生物材料的染料親和色譜（DLAC），發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)色譜復(fù)性新技術(shù)。采用具有表面大孔結(jié)構(gòu)的殼聚糖-硅基（CS-silica）材料作為DL

2、AC的基質(zhì)材料。利用基質(zhì)中的氨基，共價(jià)偶聯(lián)親和染料配基活性藍(lán)（CBF）得到DLAC吸附劑。模型蛋白質(zhì)過氧化氫酶經(jīng)6 mol/L尿素變性后，DLAC可迅速去除變性劑，并通過CBF-CS-silica的吸附成功實(shí)現(xiàn)過氧化氫酶的復(fù)性。利用熒光光譜和過氧化氫酶活性研究考察了變性過程并對色譜洗脫步驟進(jìn)行優(yōu)化。與常規(guī)吸附復(fù)性法相比，可在蛋白質(zhì)濃度提高20倍的條件下進(jìn)行DLAC復(fù)性。
　　 2、提出了制備新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)的有效途徑。以球

3、形硅膠作為支載核、以殼聚糖有機(jī)-無機(jī)雜化層作為殼，基于溶膠-凝膠反應(yīng)，通過氨水簡單處理后制備了該吸附劑。在基質(zhì)上固定金屬離子后，即得到吸附蛋白質(zhì)的固定化金屬親和吸附劑。掃描電鏡表征表明，經(jīng)氨水溶液簡單處理后，基質(zhì)具有穩(wěn)定的多孔表面。X-衍射分析表明，有機(jī)-無機(jī)雜化和氨水處理過程可破壞殼聚糖的結(jié)晶區(qū)，從而提高活性氨基的可利用度。采用同步熱重-微量熱分析進(jìn)一步對制備的基質(zhì)進(jìn)行了表征。在基質(zhì)表面固定作為特異性親和配體Cu2+后，制備了新型固定

4、化金屬親和吸附劑。以BSA為模型蛋白，通過吸附實(shí)驗(yàn)考察了該吸附劑的吸附性能。該吸附劑對BSA吸附速度快、吸附容量大。提出的方法及制備的基質(zhì)在生化分析中具有潛在的應(yīng)用前景。
　　 3、提出了制備新型有機(jī)-無機(jī)生物吸附劑的有效途徑。以球形硅膠作為支載核、以殼聚糖有機(jī)-無機(jī)雜化層作為殼，基于通過溶膠-凝膠反應(yīng)，經(jīng)氫氧化鈉溶液簡單處理后制備了該生物吸附劑。有機(jī)-無機(jī)雜化層通過殼聚糖與前驅(qū)體γ-環(huán)氧丙氧丙基三甲氧基硅烷（GPTMS）溶膠-