染料親和色譜復(fù)性蛋白質(zhì)新方法的研究及其應(yīng)用.pdf

1、本論文分三部分，第一部分，基于大孔生物材料的染料親和色譜，發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)色譜復(fù)性新技術(shù)；第二部分，基于溶膠-凝膠法，通過(guò)氨水溶液簡(jiǎn)單處理制備了球形硅膠支載的固定化金屬親和吸附劑；第三部分，基于溶膠-凝膠法，通過(guò)氫氧化鈉溶液簡(jiǎn)單處理制備了球形硅膠支載的生物吸附劑。
　　 1、基于大孔生物材料的染料親和色譜（DLAC），發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)色譜復(fù)性新技術(shù)。采用具有表面大孔結(jié)構(gòu)的殼聚糖-硅基（CS-silica）材料作為DL

2、AC的基質(zhì)材料。利用基質(zhì)中的氨基，共價(jià)偶聯(lián)親和染料配基活性藍(lán)（CBF）得到DLAC吸附劑。模型蛋白質(zhì)過(guò)氧化氫酶經(jīng)6 mol/L尿素變性后，DLAC可迅速去除變性劑，并通過(guò)CBF-CS-silica的吸附成功實(shí)現(xiàn)過(guò)氧化氫酶的復(fù)性。利用熒光光譜和過(guò)氧化氫酶活性研究考察了變性過(guò)程并對(duì)色譜洗脫步驟進(jìn)行優(yōu)化。與常規(guī)吸附復(fù)性法相比，可在蛋白質(zhì)濃度提高20倍的條件下進(jìn)行DLAC復(fù)性。
　　 2、提出了制備新型有機(jī)-無(wú)機(jī)復(fù)合基質(zhì)的有效途徑。以球

3、形硅膠作為支載核、以殼聚糖有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化層作為殼，基于溶膠-凝膠反應(yīng)，通過(guò)氨水簡(jiǎn)單處理后制備了該吸附劑。在基質(zhì)上固定金屬離子后，即得到吸附蛋白質(zhì)的固定化金屬親和吸附劑。掃描電鏡表征表明，經(jīng)氨水溶液簡(jiǎn)單處理后，基質(zhì)具有穩(wěn)定的多孔表面。X-衍射分析表明，有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化和氨水處理過(guò)程可破壞殼聚糖的結(jié)晶區(qū)，從而提高活性氨基的可利用度。采用同步熱重-微量熱分析進(jìn)一步對(duì)制備的基質(zhì)進(jìn)行了表征。在基質(zhì)表面固定作為特異性親和配體Cu2+后，制備了新型固定

4、化金屬親和吸附劑。以BSA為模型蛋白，通過(guò)吸附實(shí)驗(yàn)考察了該吸附劑的吸附性能。該吸附劑對(duì)BSA吸附速度快、吸附容量大。提出的方法及制備的基質(zhì)在生化分析中具有潛在的應(yīng)用前景。
　　 3、提出了制備新型有機(jī)-無(wú)機(jī)生物吸附劑的有效途徑。以球形硅膠作為支載核、以殼聚糖有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化層作為殼，基于通過(guò)溶膠-凝膠反應(yīng)，經(jīng)氫氧化鈉溶液簡(jiǎn)單處理后制備了該生物吸附劑。有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化層通過(guò)殼聚糖與前驅(qū)體γ-環(huán)氧丙氧丙基三甲氧基硅烷（GPTMS）溶膠-