Mfn2基因在小鼠先天性白內(nèi)障發(fā)生中的作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  Mfn2基因蛋白是一種線粒體外膜融合蛋白,具有維持mtDNA和線粒體呼吸功能穩(wěn)定的作用。此外,Mfn2基因蛋白還存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,介導線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)連接和鈣離子轉運。Mfn2基因表達缺失可以影響線粒體氧化磷酸化,促進內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,導致ROS產(chǎn)生增加。已證明ROS損傷是各種類型白內(nèi)障發(fā)生的共同途徑,本研究擬探討Mfn2基因在表皮外胚層條件敲除后對小鼠晶狀體發(fā)育的影響,并初步研究Mfn2基因敲除導致的小鼠先天性白內(nèi)障發(fā)生機制

2、。
  方法:
  采用原位分子雜交的方法在RNA水平檢測Mfn1、Mfn2基因在C57BL/6小鼠胚胎眼球發(fā)育過程中表達位置和表達量。運用Cre-Loxp技術建立Mfn2基因表皮外胚層細胞特異性敲除小鼠模型;PCR確定胚胎及小鼠的基因型,Le-cre;Mfn2flox/flox(Mfn2 cko)小鼠為基因敲除組,Mfn2flox/flox(Mfn2 flox)小鼠為野生對照組;散瞳后裂隙燈顯微鏡檢查敲除組和野生組小鼠眼球

3、發(fā)育情況,解剖顯微鏡下剖出晶狀體并照相;HE染色法觀察不同胚胎發(fā)育階段及生后兩組小鼠眼球發(fā)育的差異;野生型小鼠作為對照組,免疫熒光檢測胚胎眼球在不同發(fā)育階段Brdu標記陽性的晶狀體上皮細胞數(shù);Tunel法檢測胚胎期及出生后晶狀體上皮細胞凋亡;Trizol法提取敲除組和野生組小鼠晶狀體RNA,Real-Time PCR法比較兩組Bip mRNA表達差異。采用student t檢驗對各組資料進行分析,P<0.05有統(tǒng)計學意義。
  結

4、果:
  Mfn1、Mfn2基因mRNA在眼球發(fā)育過程中均以晶狀體表達為主,在胚胎11.5天-13.5天,Mfn1基因mRNA在視網(wǎng)膜有短暫表達。Mfn2基因條件敲除小鼠晶狀體Bip mRNA表達增加。在未成年期就可觀察到小眼球畸形和白內(nèi)障形成。對胚胎期和生后小鼠眼球切片進行HE染色發(fā)現(xiàn),胚胎14.5天和胚胎17.5天Mfn2基因條件敲除小鼠眼球和晶狀體體積減小,晶狀體纖維略疏松,出生后晶狀體病理變化明顯,從赤道部晶狀體細胞核正常

5、的弓形結構消失、晶狀體上皮下纖維核保留及小范圍皮質(zhì)空泡迅速發(fā)展為彌漫性晶狀體結構的異常,還出現(xiàn)角膜基質(zhì)層增厚和視網(wǎng)膜結構異常。野生型小鼠胚胎14.5天和胚胎17.5天幾乎無晶狀體上皮細胞凋亡,Mfn2基因敲除小鼠赤道周圍晶狀體上皮細胞凋亡明顯。和野生型小鼠相比,Mfn2基因敲除小鼠胚胎17.5天Brdu標記的增殖細胞數(shù)明顯下降。
  結論:
  Mfn1、Mfn2基因mRNA在小鼠胚胎眼球發(fā)育過程中,主要在晶狀體內(nèi)表達。表皮

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