小劑量TNF-α預處理骨髓間充質(zhì)干細胞移植對豬急性心肌梗死后心功能的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
  急性心肌梗死是一種嚴重的心血管疾病,具有發(fā)病急、病死率和致殘率高等特點,給患者和家庭帶來嚴重的經(jīng)濟和精神負擔,因此針對心肌梗死的治療成為醫(yī)學界關(guān)心和研究的焦點。自O(shè)rlic等[1]利用干細胞治療冠心病以來,骨髓間充質(zhì)干細胞已被廣泛應用于心肌梗死的治療,雖然取得了一定的療效,總體治療效果仍然差強人意。如何提高BMSCs的治療效果,以及BMSCs發(fā)揮治療作用的機制仍需更加深入的研究。
  目的:
  1.分離、

2、培養(yǎng)、鑒定骨髓間充質(zhì)干細胞。
  2.探討TNF-α預處理骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植對豬急性心肌梗死后心功能的影響,小劑量TNF-α是否可以提高BMSCs對心肌梗死的治療效果,為心肌梗死的干細胞治療提供理論依據(jù)。
  方法:
  1.利用密度梯度離心法分離豬骨髓間充質(zhì)干細胞,體外培養(yǎng)、傳代,通過檢測細胞表面抗原及定向誘導分化潛能,鑒定BMSC

3、s。
  2.12頭巴馬香豬,隨機分為TNF-α預處理組、BMSCS組和對照組,利用心導管介入球囊封堵左冠狀動脈前降支方法,建立心肌梗死模型。預處理組經(jīng)導管注入DAPI標記過的TNF-α預處理后BMSCs; BMSCs組注入DAPI標記過的BMSCs;對照組注入等量無菌培養(yǎng)基。造模前、術(shù)后1w、2w、3w、4w采取血標本,提取血清,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent,Elisa)檢測血管內(nèi)皮生

4、長因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)濃度,術(shù)前、術(shù)后4w行超聲心動圖檢測心功能變化,術(shù)后4w處死動物,HE、Masson染色觀察梗死區(qū)組織學變化,Ⅷ因子免疫組化染色比較新生血管變化,熒光顯微鏡下觀察移植細胞分布情況,Ⅷ因子免疫熒光染色,觀察移植細胞與Ⅷ因子表達情況。
  結(jié)果:
  1.密度梯度離心

5、法獲得原代BMSCs量比較少,接種后貼壁生長,大部分呈梭形,接種后1周以內(nèi)生長緩慢,12-14天進行笫一次傳代,3代后生長速度加快,形態(tài)比較均一呈長梭形,旋渦狀或輻射狀排列。免疫熒光檢測顯示高表達CD29,不表達CD34。取第3代細胞進行體外定向誘導分化,可成功分化為骨細胞和脂肪細胞。
  2.總計12頭動物參與造模。成功率100%。術(shù)前各組動物心功能均正常,無差異。心梗后4周,預處理組及BMSCs組心功能較對照組明顯改善,差異有

6、顯著意義,(P<0.05);預處理組左室射血分數(shù)較BMSCs組有明顯改善,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
  3.HE及Masson染色結(jié)果顯示預處理組梗死區(qū)形態(tài)改變好于其他各組。
  4.預處理組Ⅷ因子及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達率均高于MSCS組和對照組。
  5.預處理組TNF-α表達量高于對照組,差異顯著(P<0.05);心梗后第2周、3周,預處理組高于BMSCs組,BMSCs組高于對照組,差異顯著(

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