小劑量TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)豬急性心肌梗死后心功能的影響.pdf

1、背景：
　　急性心肌梗死是一種嚴(yán)重的心血管疾病，具有發(fā)病急、病死率和致殘率高等特點(diǎn)，給患者和家庭帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，因此針對(duì)心肌梗死的治療成為醫(yī)學(xué)界關(guān)心和研究的焦點(diǎn)。自O(shè)rlic等[1]利用干細(xì)胞治療冠心病以來，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞已被廣泛應(yīng)用于心肌梗死的治療，雖然取得了一定的療效，總體治療效果仍然差強(qiáng)人意。如何提高BMSCs的治療效果，以及BMSCs發(fā)揮治療作用的機(jī)制仍需更加深入的研究。
　　目的：
　　1.分離、

2、培養(yǎng)、鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　2.探討TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)移植對(duì)豬急性心肌梗死后心功能的影響，小劑量TNF-α是否可以提高BMSCs對(duì)心肌梗死的治療效果，為心肌梗死的干細(xì)胞治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.利用密度梯度離心法分離豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、傳代，通過檢測(cè)細(xì)胞表面抗原及定向誘導(dǎo)分化潛能，鑒定BMSC

3、s。
　　2.12頭巴馬香豬，隨機(jī)分為TNF-α預(yù)處理組、BMSCS組和對(duì)照組，利用心導(dǎo)管介入球囊封堵左冠狀動(dòng)脈前降支方法，建立心肌梗死模型。預(yù)處理組經(jīng)導(dǎo)管注入DAPI標(biāo)記過的TNF-α預(yù)處理后BMSCs; BMSCs組注入DAPI標(biāo)記過的BMSCs;對(duì)照組注入等量無菌培養(yǎng)基。造模前、術(shù)后1w、2w、3w、4w采取血標(biāo)本，提取血清，酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent，Elisa)檢測(cè)血管內(nèi)皮生

4、長因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-a，TNF-α)濃度，術(shù)前、術(shù)后4w行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心功能變化，術(shù)后4w處死動(dòng)物，HE、Masson染色觀察梗死區(qū)組織學(xué)變化，Ⅷ因子免疫組化染色比較新生血管變化，熒光顯微鏡下觀察移植細(xì)胞分布情況，Ⅷ因子免疫熒光染色，觀察移植細(xì)胞與Ⅷ因子表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.密度梯度離心

5、法獲得原代BMSCs量比較少，接種后貼壁生長，大部分呈梭形，接種后1周以內(nèi)生長緩慢，12-14天進(jìn)行笫一次傳代，3代后生長速度加快，形態(tài)比較均一呈長梭形，旋渦狀或輻射狀排列。免疫熒光檢測(cè)顯示高表達(dá)CD29，不表達(dá)CD34。取第3代細(xì)胞進(jìn)行體外定向誘導(dǎo)分化，可成功分化為骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。
　　2.總計(jì)12頭動(dòng)物參與造模。成功率100％。術(shù)前各組動(dòng)物心功能均正常，無差異。心梗后4周，預(yù)處理組及BMSCs組心功能較對(duì)照組明顯改善，差異有

6、顯著意義，(P＜0.05);預(yù)處理組左室射血分?jǐn)?shù)較BMSCs組有明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.HE及Masson染色結(jié)果顯示預(yù)處理組梗死區(qū)形態(tài)改變好于其他各組。
　　4.預(yù)處理組Ⅷ因子及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)率均高于MSCS組和對(duì)照組。
　　5.預(yù)處理組TNF-α表達(dá)量高于對(duì)照組，差異顯著(P＜0.05);心梗后第2周、3周，預(yù)處理組高于BMSCs組，BMSCs組高于對(duì)照組，差異顯著(