大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同種異體移植治療急性心肌梗死.pdf

1、目的 建立大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)體外分離、培養(yǎng)、傳代及誘導(dǎo)分化的實(shí)驗方法；觀察MSCs能否經(jīng)體外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞：探討MSCs同種異體移植治療急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)的可行性。 方法 2月齡健康雌性Wistar大鼠55只,5只用于提供MSCs；余50只用于建立AMI模型,隨

2、機(jī)分為兩組,MSCs移植組和對照組各25只。 取大鼠雙側(cè)股骨、脛骨、肱骨,用DMEM培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔,將沖洗液移入培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。以貼壁篩選法分離、純化MSCs。當(dāng)MSCs達(dá)80%融合時消化傳代。MSCs傳至第3代覆蓋瓶底達(dá)50%時開始加入終濃度為10μmol/L的5-aza誘導(dǎo),作用24h。以后每代細(xì)胞覆蓋瓶底達(dá)50%時均給予5-aza誘導(dǎo)1次。用熒光相差顯微鏡觀察各代細(xì)胞的形態(tài)改變和生長分化情況。以傳至第15代達(dá)80%融合、5-az

3、a誘導(dǎo)13次、培養(yǎng)達(dá)4個月之久的MSCs作為移植細(xì)胞備用。少量移植細(xì)胞用于透射電鏡觀察和免疫組化鑒定心肌特異性蛋白,余者均在5-溴脫氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,BrdU)標(biāo)記后用于移植。 應(yīng)用液氮冷凍法制作大鼠AMI模型,選擇梗死灶及其周圍共四個位點(diǎn)為注射點(diǎn),移植組每點(diǎn)注入MSCs懸液70μl(4~5×10~6個細(xì)胞),對照組注入等量DMEM液。分別于術(shù)前1天、術(shù)后1周、術(shù)后4周行組織多普勒超聲心動圖(Tissue