DDX43促進AML形成作用及相關基因OCT4在AML中表達研究.pdf

1、目的：
　　探索腫瘤/睪丸基因 DDX43在急性髓系白血?。ˋML）中的致病機制。分析DDX43及OCT4等在AML細胞中的相關性，研究AML患者中OCT4的表達狀況及臨床相關性。
　　方法：
　　1.應用RQ-PCR技術檢測OCT4基因的表達水平，并使用SPSS20.0軟件對臨床數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　2.構建 DDX43過表達的HL60及 SHI-1穩(wěn)定細胞株，應用 PQ-PCR以及Western Blot技

2、術從mRNA及蛋白水平檢測DDX43轉染AML細胞中的表達情況。
　　3.進行細胞生長實驗、生存實驗、周期實驗、分化實驗以及腫瘤球形成實驗，觀察 DDX43轉染細胞的增殖、生存及自我更新能力；DDX43轉染細胞皮下接種裸鼠，記錄裸鼠的體重及腫瘤體積變化；裸鼠處死后，用 RQ-PCR及Western Blot技術檢測裸鼠腫瘤中DDX43的表達狀況。
　　4.運用RQ-PCR技術檢測DDX43轉染細胞中OCT4、NANOG以及C

3、-MYC的表達水平，另采用Western Blot技術檢測DDX43轉染細胞中C-MYC的表達狀況。
　　結果：
　　1. OCT4在 AML中的研究結果：（1）與對照組相比，AML患者的OCT4基因表達水平明顯更高（P＜0.01）。OCT4的表達水平與患者的性別、年齡、外周血紅蛋白、血小板計數(shù)均無明顯的相關性（P＞0.05），但OCT4高表達組的患者比OCT4低表達組患者的白細胞計數(shù)要更高（P=0.001）。另外，M3患者

4、OCT4的高表達率要明顯低于其他類型的AML患者的OCT4高表達率（P=0.012）。（2） OCT4表達水平能夠有效鑒別AML患者和對照組，AUC為0.915（95％的可信區(qū)間為0.837～0.992；P＜0.001）。當OCT4表達水平＜0.56時，其靈敏度和特異性分別為75.9％和81.2％。（3）高表達OCT4的患者和低表達OCT4的患者的完全緩解率不存在明顯的差異（54%比65%，P＞0.05）。在所有年齡低于70歲的患者中，

5、我們發(fā)現(xiàn)低OCT4表達患者比高OCT4表達的患者OS明顯延長，且差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.048）。
　　2. DDX43在 AML中的致病機制的研究成果：（1） DDX43轉染細胞的DDX43表達量均明顯高于對照組（P＜0.01）。（2）DDX43轉染細胞生長速度均明顯快于對照組（P＜0.01）；DDX43轉染細胞的生存率均明顯高于對照組（P＜0.01）；在HL60細胞中，DDX43組的細胞能夠聚集形成較大腫瘤球，而對照組的細

6、胞大多散在，不能成球；DDX43的腫瘤球形成率明顯高于對照組（P＜0.05）。（3）DDX43轉染細胞的周期實驗和分化實驗的結果與對照組相比無明顯的差異（P＞0.05）。（4）DDX43組裸鼠的成瘤率明顯高于對照組；DDX43組的腫瘤體積大于對照組，兩者的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而且DDX43組的腫瘤的生長速度顯著快于對照組，兩組的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。DDX43組裸鼠腫瘤中DDX43含量明顯高于對照組，兩組的

7、差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（5）在HL60細胞中，DDX43轉染細胞中OCT4、NANOG、C-MYC的表達含量均顯著高于對照組（P＜0.01），另外Western Blot也同樣證實DDX43組的C-MYC的蛋白水平明顯高于對照組。
　　結論：
　　1. OCT4在AML中表達水平明顯升高，且OCT4基因可以作為AML預后不良的重要標志物；
　　2.構建DDX43-HL60、Mock-HL60、DDX43-