小鼠Oct4基因的克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、目的： Oct4是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)只在多能細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，其功能被認(rèn)為是控制細(xì)胞多能性的決定性因素。Oct4的這種作用機(jī)制目前并未明確，本研究將克隆小鼠Oct4基因，構(gòu)建其真核表達(dá)載體pEGFP-N2-Oct4，為今后能進(jìn)一步研究小鼠Oct4基因的生物學(xué)功能奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 用TRIzol Reagent提取小鼠胚胎干細(xì)胞總RNA，并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)獲得小鼠0ct4 DNA，將該基因連接克隆到含有增

2、強(qiáng)型綠色熒光蛋白報(bào)告基因的真核表達(dá)載體pEGFP—N2上，以構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP—N2-OCT4。 結(jié)果： 獲取小鼠胚胎干細(xì)胞OCT4基因的全序列cDNA。將能發(fā)出綠色熒光的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白報(bào)告基因融合OCT4基因構(gòu)建OCT4 cDNA真核表達(dá)質(zhì)粒，酶切后經(jīng)DNA電泳鑒定及DNA測(cè)序證實(shí)準(zhǔn)確無誤。 結(jié)論： 成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGFP-N2-OCT4，將增強(qiáng)型綠色熒光蛋白報(bào)告基因融合在OCT4基因的3