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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
最近報(bào)道TrkB的激動(dòng)劑,7,8-二羥黃酮(7,8-dihydroxyflavone,DHF)可以通過提高軸突、肌肉再生和神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞而對(duì)神經(jīng)興奮性毒性、中風(fēng)和帕金森病的動(dòng)物模型有保護(hù)作用。DHF對(duì)AD的神經(jīng)病理學(xué)的影響目前還不清楚。本研究通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)DHF是否對(duì)β淀粉樣蛋白前體(amyloidβ precursor protein,APP)的切割加工和認(rèn)知功能有影響。
方法:
將6周齡
2、APP23/PS45轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(Con組)和7,8-二羥黃酮(DHF組)。DHF組給予DHF5mg/Kg腹腔注射,Con組腹腔注射等容量的17%DMSO的PBS溶液,連續(xù)4周。最后一次藥物干預(yù)24小時(shí)后行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),測(cè)定小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭取腦,然后用Western blotting檢測(cè)腦內(nèi)Aβ淀粉樣蛋白前體(APP),β分泌酶(BACE1),β-C末端片段(β-CTF) C99/C89
3、和PS1蛋白的表達(dá)水平,ELISA檢測(cè)腦組織中Aβ40/Aβ42水平,再次使用RT-PCR檢測(cè)APP/BACE1/PS1的基因mRNA水平的變化。用免疫組化檢測(cè)AD小鼠腦內(nèi)老年斑數(shù)量。體外實(shí)驗(yàn)使用AD的細(xì)胞模型20E2和2EB2以及SH-SY5Y細(xì)胞系,使用不同濃度的DHF(0,0.25,0.50,1,5,and10mΜ)處理24小時(shí)后,再用Western blotting檢測(cè)20E2,2EB2和SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Aβ淀粉樣蛋白前體(
4、APP),β-C末端片段(β-CTF)C99/C89蛋白的表達(dá)水平,并檢測(cè)2EB2的BACE1水平。
結(jié)果:
與Con組比較,DHF組小鼠隱蔽平臺(tái)逃避潛伏期和活動(dòng)總路徑無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,穿越平臺(tái)次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);DHF組小鼠腦組織內(nèi)APP,BACE1,β-CTF和PS1蛋白表達(dá)未見明顯改變(P>0.05)同時(shí)mRNA,Aβ40/Aβ42水平和老年斑數(shù)量均未見明顯減少(P>0.05)。體外實(shí)驗(yàn)表明DHF組和
5、Con組相比,APP,BACE1,和CTF水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
我們發(fā)現(xiàn)DHF對(duì)APP,淀粉蛋白前?位分解酶1(BACE1),淀粉蛋白(Aβ)沒有作用。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)DHF對(duì)APP的切割沒有影響。DHF沒有減少APP23/PS45轉(zhuǎn)基因AD小鼠模型腦內(nèi)的老年斑的產(chǎn)生。同時(shí)DHF早期治療沒有改善AD小鼠的學(xué)習(xí)與記憶損傷。我們的研究表明DHF作為一種新藥早期用于減少Aβ的病理學(xué)改變和改善認(rèn)知缺損仍然需要
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