HCMV潛伏感染的老年小鼠AD樣神經(jīng)病理學(xué)模型的建立.pdf

1、目的:建立人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潛伏感染的老年小鼠AD樣神經(jīng)病理學(xué)模型,觀察HCMV潛伏感染引起小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)病理的改變,以期為AD(Alzheimer's disease,AD)的病因?qū)W研究及發(fā)生機(jī)制提供新的思路和合適的動(dòng)物模型.方法:將24只8周齡SPF級(jí)BALB/c小鼠按雌、雄l:1配成12對(duì),并隨機(jī)分成病毒感染組和DMEM對(duì)照組,每組6對(duì).病毒感染組每只小鼠腹腔注射HCMV懸液1×

2、105PFU/ml 1.0 ml;DMEM對(duì)照組小鼠每只腹腔注射DMEM液1.0 ml.以上兩組在屏蔽系統(tǒng)中繼續(xù)飼養(yǎng)十四個(gè)月后,將一半小鼠引頸處死,取大腦組織進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)以確定HCMV的潛伏感染:(1)勻漿進(jìn)行病毒分離及體外激活實(shí)驗(yàn);(2)PCR、RT-PCR分別檢測(cè)HCMV UL83 DNA、IE DNA和相應(yīng)的mRNA;(3)石蠟包埋切片用于原位雜交和免疫熒光,分別檢測(cè)HCMV UL83 DNA、IE DNA和HCMV pp65抗原

3、的表達(dá);(4)戊二醛固定,超薄切片用透射電鏡觀察大腦皮層神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化和皰疹樣病毒顆粒.在確定的HCMV潛伏感染小鼠腦組織的基礎(chǔ)上,通過(guò)如下實(shí)驗(yàn)觀察HCMV潛伏感染引起小鼠大腦皮質(zhì)的AD樣的病理改變:(1)HE染色觀察大腦皮質(zhì)神經(jīng)病理學(xué)改變;(2)剛果紅染色觀察淀粉樣斑塊;(3)浸銀染色觀察神經(jīng)元纖維纏結(jié)并計(jì)數(shù)單位面積中神經(jīng)元和神經(jīng)元纖維纏結(jié)的數(shù)目;(4)免疫熒光檢測(cè)Tau蛋白的表達(dá);(5)透射電鏡照片計(jì)數(shù)突觸數(shù)密度.同時(shí)對(duì)剩下的另

4、一半小鼠進(jìn)行免疫抑制干預(yù),誘導(dǎo)HCMV的體內(nèi)再激活,以進(jìn)一步確定HCMV的潛伏感染.按150mg/kg的劑量給各組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺,每隔六天注射一次,如此共注射三次,在最后一次注射后的第六天處死所有小鼠,取小鼠大腦皮質(zhì)戊二醛固定,透射電鏡觀察皰疹樣病毒顆粒.結(jié)論:1.首次建立HCMV潛伏感染老齡小鼠模型,為闡明HCMV在腦組織的潛伏感染機(jī)制奠定了重要基礎(chǔ).2.首次發(fā)現(xiàn)HCMV感染老齡小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)呈較規(guī)則折疊的絲狀包涵體,為研