D6S1043和D12S391基因座在遼寧地區(qū)漢族群體中的遺傳多態(tài)性及復(fù)合擴(kuò)增方法的研究.pdf

1、前言
　　 短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats,STR)是指重復(fù)單位長(zhǎng)度為2～6bp的重復(fù)序列,其長(zhǎng)度多態(tài)性來(lái)源于重復(fù)單位拷貝數(shù)的個(gè)體差異。STR基因座以其易于擴(kuò)增、分型準(zhǔn)確、適用于微量降解檢材、遺傳信息含量高,并能夠進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增和聯(lián)合檢測(cè)等多種優(yōu)點(diǎn),成為了目前法醫(yī)物證學(xué)最常用的遺傳標(biāo)記。
　　 面對(duì)數(shù)量日益增多和復(fù)雜性不斷提高的各種法醫(yī)學(xué)案件,為得到及時(shí)、準(zhǔn)確、權(quán)威的鑒定結(jié)果,應(yīng)用包含多個(gè)STR基

2、因座的檢測(cè)試劑盒,進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增、聯(lián)合檢測(cè)的DNA自動(dòng)化分型成為了目前法醫(yī)物證學(xué)的主流技術(shù)。自從1997年11月,美國(guó)聯(lián)邦調(diào)查局(FIB)確立了以CSF1PO,FGA,TPOX,THO1,vWA,D3S1358,D5S818,D7S820,D8S1179,D13S317,D16S539,D18S51、D21S11等13個(gè)基因座作為核心基因座以來(lái),各種包含一系列理想STR基因座的商業(yè)化試劑盒以其準(zhǔn)確、快速、方便和靈敏的特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于個(gè)人識(shí)別

3、和親子鑒定等法醫(yī)學(xué)的重要領(lǐng)域。對(duì)試劑盒中所包含的STR基因座進(jìn)行不同人群的遺傳多態(tài)性調(diào)查也隨之成為當(dāng)今法醫(yī)物證學(xué)的研究熱點(diǎn)。
　　 Sinofiler試劑盒是美國(guó)ABI公司根據(jù)中國(guó)人群的遺傳特點(diǎn),研制開發(fā)的最新試劑盒,D6S1043和D12S391兩個(gè)基因座是該試劑盒推出的,區(qū)別于其它試劑盒的新的遺傳標(biāo)記。本研究調(diào)查并獲得這兩個(gè)基因座在遼寧地區(qū)漢族人群中的遺傳多態(tài)性數(shù)據(jù),為Sinofiler試劑盒的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù),并為群

4、體遺傳學(xué)的研究提供基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。
　　 材料與方法
　　 基因組DNA提取并檢測(cè)。根據(jù)美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫(kù)公布的引物序列合成D6S1043和D12S391兩個(gè)基因座的擴(kuò)增引物,單基因座PCR擴(kuò)增后,應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)的方法分別檢測(cè)研究樣本在兩個(gè)基因座上的遺傳多態(tài)性,收集并混合包含不同等位基因的擴(kuò)增產(chǎn)物,并結(jié)合測(cè)序結(jié)果制得等位基因

5、分型標(biāo)準(zhǔn)物(Ladder)。以Ladder為參照,通過PAGE分離DNA片段結(jié)合銀染顯譜的方法,判定200例遼寧地區(qū)漢族無(wú)關(guān)個(gè)體在兩個(gè)基因座上的基因型,計(jì)算相關(guān)法醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)。調(diào)節(jié)退火溫度和引物用量比例這兩個(gè)復(fù)合擴(kuò)增的關(guān)鍵因素,建立兩個(gè)基因座的復(fù)合擴(kuò)增方法,并利用該方法對(duì)3組三聯(lián)體家系樣品進(jìn)行親緣關(guān)系的分析。
　　 結(jié)果
　　 1、本課題所研究的200例無(wú)關(guān)個(gè)體,在D6S1043基因座共發(fā)現(xiàn)由14種等位基因構(gòu)成的49種基因型

6、,等位基因分布于9～22。在D12S391基因座上共發(fā)現(xiàn)由12種等位基因構(gòu)成的43種基因型,等位基因分布于15～26。
　　 2、本研究中,D6S1043和D12S391基因座的各項(xiàng)法醫(yī)學(xué)參數(shù)如下:雜合度(H)分別為0.84.和0.87,個(gè)人識(shí)別力(DP)分別為0.9651和0.9477,非父排除率(PE)為0.7363和0.6875,多態(tài)性信息含量(PIC)分別為0.826和0.8499。
　　 3、建立了D6S104

7、3和D12S391基因座復(fù)合擴(kuò)增的方法,兩個(gè)關(guān)鍵因素退火溫度和引物比在本研究中的最佳條件分別為60℃,0.8:1。
　　 結(jié)論
　　 1、D6S1043和D12S391基因座在中國(guó)遼寧地區(qū)漢族人群中的遺傳多態(tài)性分布良好,具有較高的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。
　　 2、D6S1043和D12S391基因座的遺傳多態(tài)性存在民族和地域性差異,在人類遺傳學(xué)研究中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
　　 3、利用PAGE結(jié)合銀染檢測(cè)的方法