基于3D生物打印技術(shù)的微結(jié)構(gòu)對組織工程表皮中干細(xì)胞行為的影響.pdf

1、皮膚是機(jī)體最大的器官，因燒、創(chuàng)傷導(dǎo)致的皮膚大面積損傷會造成機(jī)體局部畸形、皮膚功能失調(diào)，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡甚至危及生命。因此，針對創(chuàng)傷后皮膚的修復(fù)再生是臨床上亟待解決的問題?；诮M織工程技術(shù)制成的皮膚替代物一度成為有效的修復(fù)途徑，但這種皮膚替代物缺少汗腺、皮脂腺、毛囊等皮膚附屬器，無法恢復(fù)正常皮膚的生理功能。目前，針對皮脂腺、毛囊的再生研究已相對成熟，但針對汗腺再生的研究進(jìn)展緩慢，有功能的再生汗腺有助于提高機(jī)體對外環(huán)境的適應(yīng)能力和恢復(fù)排汗功能

2、。表皮干細(xì)胞作為皮膚發(fā)育的祖細(xì)胞，在分化為皮膚和皮膚附屬器時有顯著的優(yōu)勢，是汗腺再生研究中首選的干細(xì)胞類型。本團(tuán)隊(duì)在前期已證實(shí)3D微結(jié)構(gòu)可誘導(dǎo)表皮干細(xì)胞分化為汗腺細(xì)胞，但不同構(gòu)架的3D微結(jié)構(gòu)在誘導(dǎo)效應(yīng)上有差別，這為后續(xù)基于3D生物打印技術(shù)的汗腺再生研究在結(jié)構(gòu)選擇上造成了的困難。因此探索不同構(gòu)架的3D微結(jié)構(gòu)對表皮干細(xì)胞行為的影響并建立穩(wěn)定且具良好誘導(dǎo)效應(yīng)的3D微結(jié)構(gòu)是后續(xù)研究的重要基礎(chǔ)。
　　目的:基于3D生物打印技術(shù)探索不同構(gòu)架的

3、微結(jié)構(gòu)對表皮干細(xì)胞行為學(xué)變化的影響并建立穩(wěn)定且具良好誘導(dǎo)效應(yīng)的3D微結(jié)構(gòu)，為創(chuàng)傷后皮膚的修復(fù)與再生提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:1、表皮干細(xì)胞的提取:胚胎期12.5天的GFP-C57BL/6小鼠，剪取其背部皮膚后，采用已成熟的表皮干細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。2、足趾部真皮基質(zhì)勻漿:選擇出生后0.5天的野生型C57BL/6小鼠，剪取其足趾部研磨成真皮基質(zhì)勻漿(PD)。3、3D生物打印:選擇3種不同直徑的打印噴頭（210μm、340μm和42

4、0μm）構(gòu)建微結(jié)構(gòu)。4、表皮干細(xì)胞行為學(xué)檢測:熒光顯微鏡和活/死細(xì)胞染色技術(shù)用于展示3D微結(jié)構(gòu)中表皮干細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞活性，免疫熒光染色技術(shù)用于檢測3D微結(jié)構(gòu)中表皮干細(xì)胞分化為汗腺細(xì)胞的能力。5、統(tǒng)計學(xué)分析:采用方差分析和樣本t檢驗(yàn)等方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:1、三種不同構(gòu)架的3D微結(jié)構(gòu)均可促進(jìn)小鼠表皮干細(xì)胞的有效增殖。2、在各個觀察時間點(diǎn)上，210μm組3D微結(jié)構(gòu)中的表皮干細(xì)胞活性最低，420μm組的細(xì)胞活性最高，細(xì)胞