胚胎干細(xì)胞源性表皮干細(xì)胞構(gòu)建組織工程皮膚的研究.pdf

1、本研究包括以下四個(gè)部分：　　第一部分bFGF對(duì)胚胎干細(xì)胞增殖的影響及ES細(xì)胞源性表皮干細(xì)胞分化潛能的研究1bFGF對(duì)小鼠ES細(xì)胞增殖的影響　　方法：將E14小鼠胚胎干細(xì)胞分別培養(yǎng)于含LIF106U/L及含5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL3種濃度的bFGF的ES細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，觀察細(xì)胞形態(tài)和計(jì)數(shù)ES細(xì)胞克隆數(shù)。行堿性磷酸酶(AKP)和小鼠抗人胚胎階段特異性抗原Ⅰ(stagespecificembryonicantigen

2、，SSEA-Ⅰ)單克隆抗體染色鑒定10ng/mL培養(yǎng)3d的ES細(xì)胞。　　結(jié)果：小鼠胚胎干細(xì)胞源性表皮干細(xì)胞在129小鼠腎被囊內(nèi)4w，分化為由單層或復(fù)層上皮樣細(xì)胞構(gòu)成的管狀和泡狀結(jié)構(gòu)，種植6w和8w，除上述結(jié)構(gòu)外，可見(jiàn)角化復(fù)層扁平上皮、汗腺樣、皮脂腺樣及毛囊樣等結(jié)構(gòu)。免疫組化汗腺樣結(jié)構(gòu)呈CEA和CK18陽(yáng)性?！　〉诙糠謮A性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響　　方法：用α-MEM沖洗骨髓腔，收集骨髓細(xì)胞懸液，接種在塑料

3、培養(yǎng)瓶中，經(jīng)體外擴(kuò)增、純化，觀察其生長(zhǎng)特性，用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)波形蛋白和纖粘連蛋白的表達(dá)，并研究不同濃度bFGF對(duì)骨髓MSCs生長(zhǎng)曲線和克隆形成率的影響?！　〉谌糠终嫫ぶЪ懿牧系慕M織相容性研究　　方法：將膠原、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸和甲殼糖按一定比例溶解，制備成復(fù)合凝膠，連同膠原海綿、明膠海綿三種真皮支架材料埋植入129小鼠皮下，術(shù)后3d、7d、10d、2w、3w、4w、5w、6w取材，形態(tài)學(xué)觀察材料在體內(nèi)的反應(yīng)、血管化進(jìn)