生命早期不同環(huán)境對(duì)小鼠腸道菌群定植及對(duì)哮喘模型Th1-Th2平衡的影響.pdf

1、目的：
　　探討生命早期不同環(huán)境對(duì)小鼠腸道菌群定植及其哮喘的氣道炎癥影響。
　　方法：
　　選取成年期清潔級(jí)(SPF)BALB/c小鼠24只，雌雄2∶1合籠，受孕后，將子代分組后不同時(shí)期（胎兒期、哺乳期、兒童期）分別飼養(yǎng)于不同環(huán)境中。其中A組三期均飼養(yǎng)于清潔環(huán)境，B組胎兒期及哺乳期飼養(yǎng)于清潔環(huán)境中、兒童期飼養(yǎng)于普通環(huán)境，C組胎兒期飼養(yǎng)于清潔環(huán)境，哺乳期及兒童期飼養(yǎng)于普通環(huán)境，D組三期均飼養(yǎng)子普通環(huán)境;并通過采集各組不同

2、時(shí)期（生后三天、生后三周、生后五周）小鼠糞便，提取樣本細(xì)菌總DNA，進(jìn)一步對(duì)細(xì)菌16SrDNA V3可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和DGGE電泳，獲得環(huán)境和腸道細(xì)菌分子指紋圖譜。不同環(huán)境中的小鼠飼養(yǎng)至6周后再分為哮喘模型組與對(duì)照組，哮喘模型組利用OVA腹腔注射及霧化吸入的方法建立哮喘動(dòng)物模型，檢測(cè)哮喘相關(guān)的細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ，利用Quantity One軟件分別對(duì)腸道菌群進(jìn)行多樣性分析，利用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：

3、
　　1.各組不同時(shí)間點(diǎn)腸道菌群比較:
　　(1)生后三天各組腸道菌群比較:D組腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'顯著高于A、B、C三組(P＜0.05)，A、B、C三組間兩兩比較腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(2)生后三周各組腸道菌群比較:D組腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'顯著高于A、B、C三組(P＜0.05），C組腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)

4、H'和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'顯著高于A、B兩組(P＜0.05)，A、B兩組相比腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(3)生后五周各組腸道菌群比較:D組腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'、均勻度指數(shù)E和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'顯著高于A、B兩組，與C相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組腸道細(xì)菌的條帶數(shù)S'、多樣性指數(shù)H'、均勻度指數(shù)E和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'顯著高于A、B兩組(P＜0.05），A、B兩組相比腸道細(xì)菌的條帶數(shù)

5、S'、多樣性指數(shù)H'和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)D'差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.不同環(huán)境下腸道菌群定植對(duì)哮喘模型氣道炎癥的影響:
　　(1)A、B、C、D四組哮喘模型組中小鼠血清IL-4含量均較相應(yīng)各正常對(duì)照組明顯增加(P＜0.05)，IFN-γ含量均較相應(yīng)各正常對(duì)照組降低(P＜0.05)，IFN-γ/IL-4均較相應(yīng)各正常對(duì)照組降低(P＜0.05);
　　(2)A、B、C、D四組哮喘模型組中小鼠血清IL-4含量均值A(chǔ)組＞B組＞C組

6、＜D組，兩兩比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IFN-γ含量均值A(chǔ)組＜B組＜C組＜D組，兩兩比較A組IFN-γ水平明顯低于D組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，IFN-γ/IL-4均值A(chǔ)組＜B組＜C組＜D組兩，兩兩比較A組IFN-γ/IL-4水平明顯低于D組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(3)A、B、C、D四組正常對(duì)照組中小鼠血清IL-4含量均值A(chǔ)組＞B組＞C組＞D組，兩兩比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IFN-γ含量均值A(chǔ)組

7、＜B組＜C組＜D組，兩兩比較A組IFN-γ水平明顯低于D組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，IFN-γ/IL-4均值A(chǔ)組＜B組＜C組＜D組兩，兩兩比較兩兩比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)生命早期居住環(huán)境微生物暴露差異影響小鼠早期腸道菌群結(jié)構(gòu)的多樣性。胎兒期及哺乳期居住環(huán)境微生物越多樣，腸道菌群越具多樣性;兒童期微生物暴露差異不影響腸道菌群差異。
　　(2)生命早期腸道菌群定植多樣性