生命早期抗生素使用對(duì)Th1-Th2平衡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分生命早期抗生素使用對(duì)大鼠Th1/Th2類因子表達(dá)的影響
　　目的：
　　觀察生命早期不同日齡大鼠抗生素使用對(duì)Th1/Th2類因子表達(dá)的影響。
　　方法：
　　24只新生SD大鼠，隨機(jī)分為生后2天抗生素組（2dCef）、7天抗生素組（7dCef）、對(duì)照組，每組8只大鼠。分別于生后第2天，生后第7天腹腔注射頭孢噻肟鈉（Cefotaxime Sodium）連續(xù)3天，對(duì)照組注射等量的PBS。觀察大鼠注射抗生素前后

2、的體重變化及整體狀態(tài)，生后第35天處死，進(jìn)行肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，病理學(xué)檢測觀察肺組織細(xì)胞浸潤。雙抗夾心免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）法測定BALF中及血清中IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測肺組織中IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5的mRNA相對(duì)表達(dá)量。流式細(xì)胞技術(shù)檢測脾細(xì)胞CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞、CD4+IL-4+Th2細(xì)胞表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.腹腔

3、注射抗生素3天后，大鼠出現(xiàn)：精神萎靡，大便水樣，次數(shù)增多表現(xiàn)，尤其2dCef組表現(xiàn)明顯。2dCef組和7dCef組大鼠體重生長緩慢，腹腔注射3天后的體重與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）。
　　2.各組大鼠肺組織病理切片無明顯不同，肺組織基本無炎性改變，肺泡內(nèi)無滲出，間隔無明顯增厚，血管周圍無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。
　　3.BALF中2dCef組的細(xì)胞總數(shù)，中性粒細(xì)胞（Neu），淋巴細(xì)胞(Lym)表達(dá)均顯著高于對(duì)照組（P<

4、0.05），而7dCef組則無顯著性差異（P>0.05）。三組大鼠BALF中均未見嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。
　　4.Th1類因子：IL-12在BALF、血清及肺臟mRNA水平表達(dá)，2dCef組和7dCef組的均低于對(duì)照組（P<0.05）、2dCef組較7dCef組下降更顯著（P<0.05）；IFN-γ在BLAF中，2dCef組和7dCef組的均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）、2dCef組較7dCef組下降更顯著（P<0.05），血

5、清、肺臟mRNA水平的表達(dá)三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Th2類因子：IL-4在BALF、血清、肺臟mRNA水平的表達(dá)，2dCef組和7dCef組的均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）、2dCef組較7dCef組上升更顯著（P<0.05）；IL-5在BALF、血清及肺臟mRNA水平的表達(dá)三組間無顯著性差異（P>0.05）。
　　5.脾細(xì)胞中CD4+IFN-γ+Th1細(xì)胞表達(dá)及CD4+IL-4+Th2細(xì)胞表達(dá)三組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.生命早期抗生素使用可影響幼年大鼠的腸道功能和生長發(fā)育。
　　2.生命早期抗生素使用（2dCef組）可使BALF中炎性細(xì)胞數(shù)量增多，但并未出現(xiàn)以嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤為主肺組織反應(yīng)性炎癥。
　　3.生命早期抗生素使用可使Th1類因子IL-12表達(dá)下降，Th2類因子IL-4表達(dá)上升，且以2dCef組為顯著。
　　第二部分生命早期抗生素使用對(duì)致敏大鼠Th1/Th2類因

7、子表達(dá)的影響
　　目的：
　　觀察在生命早期抗生素使用對(duì)日后變應(yīng)原致敏大鼠Th1/Th2類因子的表達(dá)的影響。
　　方法：
　　24只新生SD大鼠，隨機(jī)分為2天抗生素致敏組（2dCef+OVA組）、7天抗生素致敏組（7dCef+OVA組）、單純致敏組（OVA組），每組8只大鼠，注射抗生素，實(shí)驗(yàn)方法同第一部分，在生后第21天，第28天的用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏。
　　結(jié)果：
　　1.BALF中2d

8、Cef+OVA組的細(xì)胞總數(shù)，中性粒細(xì)胞（Neu）表達(dá)，淋巴細(xì)胞(Lym)表達(dá)均顯著高于OVA組（P<0.05），而7dCef+OVA組與OVA組比較則無顯著性差異（P>0.05）。
　　2.各組大鼠肺組織病理切片無炎性改變。
　　3.Th1類因子：IL-12在BALF、血清及肺臟mRNA水平表達(dá)，2dCef+OVA組和7dCef+OVA組的均低于OVA組（P<0.05）、2dCef+OVA組較7dCef+OVA組下降更顯著（

9、P<0.05）；IFN-γ在BLAF、血清中及肺臟mRNA的相對(duì)表達(dá)量3組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Th2類因子：IL-4在BALF、血清及肺臟mRNA水平表達(dá)，2dCef+OVA組和7dCef+OVA組的均顯著高于OVA組（P<0.05）、2dCef+OVA組較7dCef+OVA組上升更顯著（P<0.05）；IL-5在BALF、血清及肺臟mRNA水平的表達(dá)3組間無顯著性差異（P>0.05）。
　　4.脾細(xì)胞中CD4+I