放創(chuàng)復合傷肉芽組織來源細胞生物學特性的實驗研究.pdf

1、放創(chuàng)復合傷是指合并有放射損傷的復合性創(chuàng)傷，其通常發(fā)生于核爆炸、核事故、放射性恐怖襲擊以及與臨床手術放療病人當中。放射復合傷的突出特點是多種致傷因素聯(lián)合作用，顯著加重傷情，通常具有很高的致死率。相較于單純創(chuàng)傷，放創(chuàng)復合損傷傷情更加復雜并且治療難度更大，其中由于組織修復困難而成為代表性的難愈性創(chuàng)傷，是放創(chuàng)復合傷致死致殘的重要原因。
　　創(chuàng)面損傷修復是一個復雜連續(xù)的生物學過程，而復合傷組織修復不僅是單純的局部創(chuàng)面愈合過程，而且受到全身反

2、應的影響和調(diào)節(jié)，能夠明顯的加重損傷的程度，并且延長愈合的時間。遺憾的是，在目前并沒有針對放創(chuàng)復合傷的理想的治療方法?，F(xiàn)代醫(yī)學中在各種疾病，包括血液性、免疫疾病、嚴重燒傷以及腫瘤等的治療中都采用過基于干細胞的治療手段，這種特殊的治療方法為放創(chuàng)復合傷的治療也開辟了新的思路。干細胞治療在目前是一種新興的治療手段，但因其所具有的高效性和靶向性，仍具有良好的研究及治療前景。然而細胞來源成為了干細胞治療中存在的一個最突出的問題。
　　近幾十年

3、的干細胞研究從基礎逐漸進入到臨床，早期結果也十分令人鼓舞。在細胞治療領域，我國科學家已緊緊跟上了國際前沿技術的腳步，在某些領域，其研究已經(jīng)達到了世界領先的水平。干細胞是幾乎所有的成體組織中都存在的一類具有自我更新與增殖分化能力的細胞。在目前發(fā)現(xiàn)的多種干細胞群中，胚胎干細胞在倫理方面存在著很大的負面影響，而廣受關注iPS細胞也具有一定的安全隱患，因此，成體干細胞在治療應用中最具有可行性。自體或異體骨髓來源的間充質(zhì)干細胞是成體干細胞中在基礎

4、實驗和臨床中應用最為廣泛的一種。眾所周知，淋巴造血系統(tǒng)的細胞對輻射具有很高的敏感性，在受到輻照后很容易造成致死性的傷害，這就是說，對放創(chuàng)復合傷患者來講，骨髓細胞并不是自體細胞治療中最理想的細胞來源，也說明我們急需探索其他細胞來源。
　　皮膚是人體中最大的器官，由上皮組織和和真皮組織組成，包括來源于三個胚層的多種不同的組織細胞，自我更新和再生修復速度快，是成體干細胞分離和研究的良好對象。在近幾十年來，研究者們開始越來越關注真皮細胞在

5、創(chuàng)傷修復和其他皮膚疾病中所起到的重要作用。作為最表淺的部位，我們也能通過簡易的途徑獲得大量的細胞。本課題組早在2001年就成功分離和培養(yǎng)出了大鼠真皮多能間充質(zhì)干細胞，并證明了其具有良好的自我增殖及誘導分化的生物學特性。目前，肉芽組織來源的細胞因其在組織修復中的重要治療效應而被看作是一個充足的細胞來源，在近兩年的工作中我們也進一步研究了創(chuàng)面肉芽中分離出的間充質(zhì)干細胞在創(chuàng)面治療中發(fā)揮的治療效果。由于皮膚對放射敏感性相對較低，而放創(chuàng)復合傷肉芽

6、組織來源細胞的生物學特性尚未見系統(tǒng)研究，因此，我們提出這樣一個推測，放創(chuàng)復合傷肉芽來源的細胞能夠保持良好的生物學特性，并作為重要的自體細胞移植治療的細胞來源。
　　在本課題中，我們探討了復合傷肉芽組織來源細胞的一些重要特性，其中多種涉及到放射敏感性的生物學特性由骨髓來源細胞、新生鼠真皮細胞以及單創(chuàng)肉芽組織來源細胞作為對照進行研究。根據(jù)實驗結果我們得出以下一些結論:
　　1.放射損傷能明顯延長創(chuàng)面的修復過程，通過比較單創(chuàng)和復合

7、傷肉芽中Ki67陽性細胞和新生血管的數(shù)量，發(fā)現(xiàn)延遲愈合時間大概在2～3天。
　　2.采用骨髓來源細胞作為對照評估復合傷肉芽組織細胞的體外培養(yǎng)特性和自我增殖能力，發(fā)現(xiàn)骨髓來源細胞對放射損傷具有很高的敏感性，在經(jīng)照射后細胞出現(xiàn)明顯衰老損傷現(xiàn)象，而肉芽來源細胞能夠保持較好的細胞活力及體外增殖能力，提示肉芽來源細胞具有明顯的體外擴增優(yōu)勢。
　　3.通過比較分離的復合傷肉芽來源細胞、單創(chuàng)肉芽來源細胞和新生鼠真皮細胞與干細胞有關的生物學

8、特性，發(fā)現(xiàn)放創(chuàng)復合傷肉芽細胞和另兩組細胞具有較為一致的增殖能力、遷移能力和粘附能力，雖然在集落形成和誘導分化能力中有一定程度減弱，但仍然保持在一個較高的水平，進一步支持復合傷肉芽組織細胞能夠保持較好的生物學功能。
　　4.通過在創(chuàng)面局部注射分離培養(yǎng)的復合傷肉芽來源細胞，并觀察創(chuàng)面愈合、細胞定植以及創(chuàng)面瘢痕愈合情況，證明復合傷肉芽組織細胞對創(chuàng)面修復能夠發(fā)揮促進作用。另外，配制復合傷肉芽細胞培養(yǎng)上清的條件培養(yǎng)基對細胞生長情況產(chǎn)生的影響