黃蜀葵花總黃酮對缺血性損傷的保護機制研究.pdf

1、黃蜀葵花為錦葵科秋葵屬植物黃蜀葵的干燥花，最先記錄在《嘉佑本草》，分布廣泛、資源豐富?！侗静菥V目》記載:其花氣味甘、寒、滑、無毒，主治小便淋及催生，治諸惡瘡膿水久不瘥者，作末敷之即愈，為瘡家要藥，消疽腫，浸油涂湯火傷等?，F(xiàn)代研究證實黃蜀葵花提取物黃酮類成分不僅對瘡瘍有明顯的治療作用，對缺血導致心、腦、組織等損傷也具有明顯的保護作用。本論文通過黃蜀葵花總黃酮在體外對內(nèi)皮祖細胞抑制凋亡作用及對整體水平缺血性損傷的保護作用進行系統(tǒng)的探討，研究

2、內(nèi)容如下:
　　當組織因各種原因?qū)е碌娜毖l(fā)生后，組織的無氧代謝替換了有氧代謝，產(chǎn)生大量的糖酵解產(chǎn)物，導致組織水腫、炎癥浸潤及組織纖維壞死，組織損傷發(fā)生。對于缺血性損傷疾病的發(fā)病機制，目前公認的作用機制涉及能量代謝、鈣超載、氧自由基、炎癥細胞活化和各種促炎性細胞因子釋放等因素，但其發(fā)病的具體分子機制尚未完全闡明，抑制組織損傷的藥物也正處于研究階段，目前臨床尚無針對發(fā)生缺血后抑制組織損傷的保護、治療性藥物。各種治療方向最終均作用于內(nèi)

3、皮細胞，促進內(nèi)皮細胞向血管上皮細胞轉(zhuǎn)化，促進血管新生達到組織修復(fù)、器官功能恢復(fù)的最終目的。傳統(tǒng)醫(yī)學在治療缺血性疾病方面歷史悠久，效果顯著。其中黃蜀葵花在難治性瘡瘍治療中體現(xiàn)出良好療效，現(xiàn)代醫(yī)學研究已經(jīng)證實一定劑量的黃蜀葵花總黃酮對內(nèi)皮細胞的遷移和分化具有明顯的促進作用。內(nèi)皮細胞來源于內(nèi)皮祖細胞，而內(nèi)皮祖細胞在體內(nèi)數(shù)量極少，提高內(nèi)皮祖細胞在缺血缺氧狀態(tài)下抗氧化、抑制凋亡及抑制炎癥能力并促進其轉(zhuǎn)化為成熟的內(nèi)皮細胞也是治療缺血性疾病的關(guān)鍵。黃

4、蜀葵花總黃酮作為傳統(tǒng)中藥的提取物，具有多組份優(yōu)勢，在復(fù)雜的缺血性損傷中起到保護并治療的多靶點作用值得探討。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)后肢缺血大鼠動物模型，觀察TFA對炎癥的抑制作用。經(jīng)過后肢缺血大鼠實驗?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建，給予黃蜀葵花總黃酮干預(yù)四周后處死大鼠，通過流式細胞技術(shù)檢測血液中調(diào)節(jié)性T細胞亞群在模型及給藥前后的變化水平，確定黃蜀葵花總黃酮具有抑制炎癥，促進損傷部位愈合的作用;RT-PCR進一步驗證了損傷部位腫瘤壞死因子α的表達水

5、平，黃蜀葵花總黃酮可以顯著抑制腫瘤壞死因子α的基因表達水平，抑制炎癥反應(yīng)在損傷部位的級聯(lián)反應(yīng)，通過促血管生成進而達到對缺血性損傷的保護。該部分的研究結(jié)果與后續(xù)藥效學數(shù)據(jù)一致，也從另一個角度驗證了黃蜀葵花總黃酮對缺血組織的保護作用，同時首次證實了黃蜀葵花總黃酮具有調(diào)控調(diào)節(jié)性T細胞細胞亞群的作用。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)不同狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細胞，觀察TFA的抗凋亡作用。在體外條件下進行藥理學實驗研究，確定黃蜀葵花總黃酮在體外條件下可

6、以保護內(nèi)皮祖細胞的免受ROS引起的氧化損傷，對內(nèi)皮祖細胞的增殖分化具有保護作用。內(nèi)皮祖細胞經(jīng)過H2O2處理后，發(fā)生明顯的細胞凋亡，但是經(jīng)過黃蜀葵花總黃酮的藥物干預(yù)后，RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)基因Bak，caspase-3，caspase-9基因表達量明顯降低，顯示出黃蜀葵花總黃酮具有明顯的抗凋亡作用。由此推測在整體水平，黃蜀葵花總黃酮具有相同的作用效果，可以保護缺血損傷部位內(nèi)皮祖細胞的凋亡，進而發(fā)揮對缺血組織的保護作用。
　

7、　通過后肢缺血實驗大鼠模型的構(gòu)建，給藥TFA治療四周后處死大鼠，通過分子生物學實驗進一步驗證黃蜀葵花總黃酮的干預(yù)效果。黃蜀葵花總黃酮可以明顯改善缺血大鼠后肢的炎癥損傷水平，實驗發(fā)現(xiàn)大鼠血清中的總自由基水平明顯降低，caspase-3磷酸化水平降低，凋亡抑制蛋白Bcl-2的蛋白表達量明顯升高，證實了黃蜀葵花總黃酮的對后肢缺血組織的保護作用。
　　通過黃蜀葵花總黃酮干預(yù)心肌缺血再灌注損傷動物模型，觀察TFA的心肌缺血再灌注損傷保護作用

8、。實驗發(fā)現(xiàn)黃蜀葵花總黃酮能顯著改善心臟缺血再灌注損傷，顯著改善心臟缺血再灌注氧化應(yīng)激水平，抑制心臟缺血再灌注炎癥水平，可以顯著抑制心臟缺血再灌注狀態(tài)下的炎癥小體的激活。
　　本課題研究表明:1、黃蜀葵花總黃酮在整體水平也可以降低損傷組織的炎癥水平，下調(diào)腫瘤壞死因子α的表達，可以提高調(diào)節(jié)性T細胞亞群的比例來發(fā)揮抑制炎癥，保護受損組織的作用。2、黃蜀葵花總黃酮在體外可以保護內(nèi)皮祖細胞免受氧化應(yīng)激導致的凋亡。3、黃蜀葵花總黃酮在整體水平