糖皮質(zhì)激素對(duì)頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　頸動(dòng)脈狹窄通常是指是由脂質(zhì)堆積、炎癥細(xì)胞介入等多因素作用使頸動(dòng)脈內(nèi)中膜增厚從而使頸動(dòng)脈管腔直徑變細(xì)的一種疾病，頸動(dòng)脈斑塊形成是其主要病理過(guò)程。其起病緩慢，不易察覺(jué)，往往發(fā)生臨床癥狀后才被發(fā)現(xiàn)，如沒(méi)及時(shí)處理可能引起中風(fēng)，偏癱甚至死亡等嚴(yán)重并發(fā)癥。頸動(dòng)脈斑塊根據(jù)結(jié)構(gòu)特征可分為穩(wěn)定性斑塊和不穩(wěn)定性斑塊。對(duì)于不穩(wěn)定性斑塊頸動(dòng)脈狹窄的患者更易引起嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥。應(yīng)激是血管疾病發(fā)生發(fā)展的一類(lèi)重要影響因素，糖皮質(zhì)激素是應(yīng)激反應(yīng)

2、的樞紐。具有調(diào)節(jié)糖、脂肪、和蛋白質(zhì)的生物合成，還具有抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗毒、抗休克作用，參與機(jī)體代謝、生長(zhǎng)發(fā)育、免疫應(yīng)答、神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)以及心血管功能的調(diào)節(jié)等多種生理病理過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)，人體內(nèi)皮質(zhì)醇濃度及糖皮質(zhì)激素受體的過(guò)高表達(dá)可引起高血壓、高血糖、高血脂等心腦血管高危因素的發(fā)生。而糖皮質(zhì)激素的過(guò)量釋放對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展都有影響。那么，穩(wěn)定性斑塊頸動(dòng)脈狹窄患者與不穩(wěn)定性斑塊頸動(dòng)脈狹窄患者中的糖皮質(zhì)激素水平有無(wú)差異？?jī)山M斑塊中的

3、糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)有無(wú)差異？糖皮質(zhì)激素對(duì)頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性又有著怎樣的調(diào)控關(guān)系？闡明糖皮質(zhì)激素在頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性調(diào)控機(jī)制中的作用，為評(píng)估頸動(dòng)脈狹窄病情發(fā)展提供新的生物標(biāo)記物和干預(yù)靶點(diǎn)，對(duì)于該疾病的早期診斷和預(yù)防、病情評(píng)估和綜合治療具有重要意義。
　　研究目的:
　　1、研究不穩(wěn)定性頸動(dòng)脈斑塊頸動(dòng)脈狹窄患者與穩(wěn)定性頸動(dòng)脈斑塊頸動(dòng)脈狹窄患者血中糖皮質(zhì)激素水平及斑塊中糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)有無(wú)差異，推測(cè)糖皮質(zhì)激素及其受體在頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定

4、性中可能起到的作用。
　　2、通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證糖皮質(zhì)激素對(duì)頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的影響，明確糖皮質(zhì)激素水平的升高是機(jī)體在應(yīng)激條件下的保護(hù)性因素，還是造成斑塊不穩(wěn)定的損傷性因素。為下一步對(duì)糖皮質(zhì)激素在頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性中調(diào)控機(jī)制的研究提供依據(jù)。
　　研究方法:
　　臨床樣本研究:對(duì)2013年1月至2015年3月期間于上海長(zhǎng)海醫(yī)院血管外科擬行頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)治療的頸動(dòng)脈狹窄患者根據(jù)入組條件篩選，患者入院第二天早晨8點(diǎn)空腹采集外周靜

5、脈血4ml，斑塊由頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)中獲得。用放射免疫法測(cè)出血中糖皮質(zhì)激素水平。將斑塊石蠟包埋做成切片后，行蘇木精-伊紅及天狼星紅染色，根據(jù)染色結(jié)果將斑塊分為不穩(wěn)定性斑塊組和穩(wěn)定性斑塊組，比較兩組的糖皮質(zhì)激素分泌水平，再對(duì)兩組斑塊的巨噬細(xì)胞及糖皮質(zhì)激素受體做免疫組織化學(xué)染色，比較兩組的表達(dá)有無(wú)差異。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:給6周齡ApoE-/-小鼠行腎上腺切除術(shù)，喂以高脂飼料及生理鹽水，2周后體內(nèi)糖皮質(zhì)激素耗竭并從創(chuàng)傷中恢復(fù)，構(gòu)建小鼠頸

6、動(dòng)脈狹窄模型，隨機(jī)分為3組，并分別給予應(yīng)激劑量糖皮質(zhì)激素（5 mg/kg/d）、生理劑量糖皮質(zhì)激素(0.5 mg/kg/d)、溶劑對(duì)照進(jìn)行干預(yù)，6周后處死小鼠，收集各組小鼠靜脈血約1ml，分別檢測(cè)血清中糖皮質(zhì)激素、IL-6、hs-CRP并做比較。解剖小鼠頸動(dòng)脈，石蠟包埋、切片。行蘇木精-伊紅染色、天狼星紅染色，通過(guò)比較各組頸動(dòng)脈斑塊的膠原纖維、脂質(zhì)所占斑塊的面積百分比及纖維帽厚度進(jìn)而比較各組斑塊的穩(wěn)定性。了解不同劑量的糖皮質(zhì)激素對(duì)頸動(dòng)脈

7、斑塊穩(wěn)定性的影響。以P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　臨床樣本研究結(jié)果:入組的樣本量為52例，根據(jù)HE及天狼星紅染色結(jié)果分組，不穩(wěn)定性斑塊組35例，穩(wěn)定性斑塊組17例。兩組患者的糖皮質(zhì)激素分別為（13.45±2.74 ug/dl vs11.74±2.19 ug/dl，P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而兩組患者斑塊的巨噬細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)為(34.06±7.55％ vs25.11±7.16％，P＜0.01)，糖皮質(zhì)激

8、素受體的陽(yáng)性指數(shù)為(20.77±5.62％ vs12.62±3.19％，P＜0.001)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組剩余8只小鼠。對(duì)頸動(dòng)脈斑塊進(jìn)行HE及天狼星紅染色，通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行測(cè)量分析。應(yīng)激劑量組、生理劑量組、對(duì)照組膠原纖維所占斑塊面積百分比分別為2.09±0.32％，3.73±0.58％，2.69±0.37％，每?jī)山M間相互比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);脂質(zhì)所占斑塊面積百分比分

9、別為4.76±0.56％，2.21±0.30％，3.30±0.37％，每?jī)山M間相互比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);纖維帽厚度分別為47.0±3.6 um，64.6±4.1um，56.1±2.2 um，每?jī)山M間相互比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。血清中糖皮質(zhì)激素分別為18.50±4.68 ug/dl，5.38±1.86 ug/dl，0，與小鼠體內(nèi)應(yīng)激及生理狀態(tài)下水平基本一致。三組小鼠的斑塊穩(wěn)定性依次為生理劑量組＞對(duì)照組＞應(yīng)

10、激劑量組。IL-6分別為2.18±0.84 pg/ml，5.09±1.19 ug/dl，6.65±1.02 ug/dl; hs-CRP分別為0.62±0.24 mg/dl，1.38±0.43 mg/dl，1.84±0.26 mg/dl，炎癥因子隨著糖皮質(zhì)激素的升高而降低。
　　結(jié)論
　　臨床研究中不穩(wěn)定性斑塊組的糖皮質(zhì)激素及其受體高于穩(wěn)定性斑塊組，說(shuō)明血清中糖皮質(zhì)激素及斑塊中的糖皮質(zhì)激素受體與頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性有關(guān)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

11、中，三組小鼠的斑塊穩(wěn)定性依次為生理劑量組＞對(duì)照組＞應(yīng)激劑量組。去除了內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的影響，持續(xù)的高糖皮質(zhì)激素水平可能導(dǎo)致頸動(dòng)脈血管內(nèi)皮功能的紊亂，破壞管壁的結(jié)構(gòu)和功能，增強(qiáng)血管平滑肌的收縮性，使管腔狹窄，局部血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變，管壁的應(yīng)切力改變。這些均可導(dǎo)致頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊去穩(wěn)定化，進(jìn)而影響頸動(dòng)脈狹窄的進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸。而生理劑量的糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)而使斑塊更加穩(wěn)定。所以，長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)的糖皮質(zhì)激素水平可導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定。但具