運(yùn)用Padlock探針和LAMP技術(shù)檢測(cè)瓜類細(xì)菌性角斑病菌.pdf

1、丁香假單胞菌黃瓜致病變種(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)引起的黃瓜細(xì)菌性角斑病在世界范圍內(nèi)皆有發(fā)生，造成不同程度的損失，同時(shí)也引起甜瓜細(xì)菌性葉斑病，是一種種傳病害。近年來在中國(guó)逐漸發(fā)展嚴(yán)重，危害嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成嚴(yán)重減產(chǎn)。所以建立高效，快捷，操作簡(jiǎn)單的檢測(cè)技術(shù)是防止此病原菌傳播的有效手段。
　　瓜類細(xì)菌性果斑病(bacterial fruit blotch)的病原菌為西瓜嗜酸菌(Acidovora

2、xcitrulli)，是一種危害西瓜和甜瓜的世界檢疫性種傳病害。丁香假單胞黃瓜致病變種和西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)和在甜瓜上的發(fā)病癥狀很相似，很難用肉眼和傳統(tǒng)的檢驗(yàn)檢疫方法將兩者區(qū)分。
　　本研究運(yùn)用Padlock探針和LAMP兩種檢測(cè)方法，設(shè)計(jì)了針對(duì)丁香假單胞菌黃瓜致病變種甜瓜株系的特異性探針和LAMP，針對(duì)黃瓜株系的特異性探針和LAMP。同時(shí)進(jìn)行了特異性驗(yàn)證，靈敏度驗(yàn)證，模擬種子帶菌檢測(cè)和實(shí)際樣品檢測(cè)

3、。并將探針與Macroarray技術(shù)結(jié)合進(jìn)行了病原菌的高通量檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:這2條探針和2套LAMP均能把所有的參試菌株的這兩個(gè)株系的菌株彼此區(qū)分。模擬種子帶菌檢測(cè)率都能達(dá)到0.1％(1/1000)，將探針與Macroarray技術(shù)結(jié)合進(jìn)行實(shí)際樣品檢測(cè)，對(duì)市售的甜瓜種子和黃瓜種子進(jìn)行檢測(cè)，從205份市售甜瓜種子檢測(cè)到7份種子帶菌，而19份市售的黃瓜種子沒有檢測(cè)到帶菌信號(hào)。Padlock探針和LAMP的靈敏度最高達(dá)到100fg/μL。

4、
　　本研究在丁香假單胞菌黃瓜致病變種甜瓜株系設(shè)計(jì)的Padlock探針和LAMP，能較好地將丁香假單胞黃瓜致病變種甜瓜株系和西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)區(qū)分，為檢測(cè)瓜類細(xì)菌性果斑病提供了更多的方法。
　　同時(shí)在丁香假單胞菌黃瓜致病變種黃瓜株系和甜瓜株系設(shè)計(jì)的Padlock探針和LAMP，均能把所有參試的這兩個(gè)株系的菌株彼此區(qū)分。建立了丁香假單胞菌黃瓜致病變種的高通量檢測(cè)，通過將探針與Macroarra