抗鵝α干擾素單克隆抗體的制備及初步鑒定.pdf

1、自從1957年英國(guó)科學(xué)家Isaacs和Lindenmann發(fā)現(xiàn)干擾素(IFN)以來，干擾素的分子結(jié)構(gòu)、基因結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)特性一直被人們所關(guān)注。干擾素是一種低分子量的可溶性糖蛋白，具有抗病毒和抗腫瘤的作用。干擾素分為Ⅰ型干擾素和Ⅱ型干擾素，前者包括IFN-α和IFN-β等，IFN-α具有很強(qiáng)的抗病毒能力。IFN-α主要由白細(xì)胞、Namalwa細(xì)胞、KG-1細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、慢性髓性白血病細(xì)胞、雞新城疫病毒(NDV)或水泡性口炎病毒(VS

2、V)等誘導(dǎo)后的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生。 本研究用本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含鵝α干擾素基因的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-IFN-α作為免疫原，免疫Balb/C鼠，以原核表達(dá)的重組GoIFN-α作為檢測(cè)抗原，檢測(cè)抗鵝α干擾素的單克隆抗體。經(jīng)過細(xì)胞融合，以間接ELISA方法和有限稀釋法進(jìn)行篩選，經(jīng)3～5次亞克隆，獲得2株能穩(wěn)定分泌抗鵝α干擾素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為2H6和4C8。經(jīng)鑒定，2株雜交瘤細(xì)胞染色體數(shù)目分別為103和89條；單

3、抗亞類均為IgM，輕鏈為κ鏈；雜交瘤細(xì)胞株連續(xù)傳20代以上及凍存后復(fù)蘇，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，效價(jià)穩(wěn)定；腹水效價(jià)均達(dá)到10-4以上；Westernblot表明，McAb2H6及4C8與重組鵝IFN-α均能發(fā)生特異性反應(yīng)；競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，McAb4C8能與天然干擾素發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)抑制作用，為進(jìn)一步進(jìn)行干擾素的檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。由于2株單抗與天然及重組干擾素發(fā)生的特異性反應(yīng)有所區(qū)別，估計(jì)2株細(xì)胞抗體可能分別針對(duì)不同的抗原表位；單抗中和活性檢測(cè)結(jié)