紅景天苷對成肌細胞體外分化的影響及機制研究.pdf

1、目的：探討紅景天苷(Sal)對成肌細胞株C2C12體外分化的影響及信號轉導機制，為進一步開展Sal在體內骨骼肌中的作用及機制研究奠定基礎。
　　方法：研究1：Sal對成肌細胞體外分化的影響。1.1：在成肌細胞株C2C12中加入不同濃度 Sal誘導成肌分化過程中，用相差顯微鏡觀察不同濃度 Sal對C2C12分化過程中匯聚、融合和形成多核肌管的影響。1.2：免疫熒光組化分析Sal對C2C12成肌分化融合率的影響。1.3：real-ti

2、me PCR和WB檢測Sal對C2C12成肌分化特異基因和蛋白表達的影響。研究2：Sal影響成肌細胞體外分化的機制研究。2.1：WB檢測Sal處理對C2C12成肌分化中TGF-β/Smad通路的影響。2.2：WB、real-time PCR和免疫熒光組化檢測Smad3磷酸化抑制劑SIS3對Sal處理引起的C2C12成肌分化特異蛋白和基因的影響及TGF-β/Smad通路的變化。2.3：實驗方法同2.2檢測Myf5抑制對Sal處理引起的C2

3、C12成肌分化特異蛋白和基因的影響，應用ChIP和雙熒光素酶檢測Smad3和Myf5間關系。
　　結果：（1）Sal顯著抑制C2C12成肌分化。50ug Sal處理：A.免疫熒光結果表明Myosin-neonatal陽性面積和myogenin陽性核均顯著減少,顯著抑制C2C12分化過程中肌管形成；B.real-time PCR和WB結果表明，MyoD和myogenin基因及蛋白表達水平均顯著下降,顯著抑制C2C12分化過程中細胞的

4、融合和肌管的形成；（2）Sal通過激活Smad3磷酸化來上調Myf5進而抑制C2C12成肌分化。A.WB結果表明Sal顯著抑制C2C12分化效應伴有Smad2/Smad3磷酸化增加，尤其是Smad3；B.SIS3處理可顯著逆轉Sal誘導的Smad3磷酸化水平增加和成肌抑制；C.Myf5抑制顯著逆轉Sal誘導的成肌抑制且Smad3對Myf5的激活具有調控作用。
　　結論：Sal通過誘導成肌細胞株C2C12分化過程中TGF-β/Sma