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1、microRNAs在骨骼肌發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用?；蛐酒芯堪l(fā)現(xiàn)miR-20a和miR-106b在成肌分化過程中有動(dòng)態(tài)表達(dá)，但其對(duì)肌原細(xì)胞增殖和分化的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)miR-20a和miR-106b分別可能結(jié)合到生肌調(diào)節(jié)因子Myf5和Akt3基因mRNA的3'非編碼區(qū)(3'-UTR)，進(jìn)而對(duì)成肌分化進(jìn)行調(diào)控。本文利用肌原細(xì)胞C2C12建立體外成肌分化模型，深入探討了miR-20a通過調(diào)控Myf5表達(dá)和miR-
2、106b通過調(diào)控Myf5/Akt3表達(dá)進(jìn)而影響肌原細(xì)胞增殖和分化的分子機(jī)制。取得研究結(jié)果如下:
1.BHK-21細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-20a和miR-106bmimics可下調(diào)包含有Myf53'-UTR的雙熒光素酶報(bào)告載體的酶活性，而當(dāng)載體中miR-20a和miR-106b種子序列發(fā)生突變或細(xì)胞內(nèi)miR-20a和miR-106b的表達(dá)被抑制后，雙熒光素酶活性得到了回復(fù)。在C2C12細(xì)胞中超表達(dá)miR-20amimics可抑制MYF
3、5蛋白的表達(dá)，若同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-20ainhibitor則可回復(fù)其表達(dá)水平。這些結(jié)果表明miR-20a能作用于Myf5mRNA的3'-UTR，下調(diào)Myf5的表達(dá);miR-106b能作用于Myf5mRNA的3'-UTR。
2.BHK-21細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-106bmimics可下調(diào)包含有Akt33'-UTR的雙熒光素酶報(bào)告載體的酶活性，而當(dāng)載體中miR-106b種子序列發(fā)生突變或細(xì)胞內(nèi)miR-106b的表達(dá)被抑制后，雙熒光素酶活
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