長非編碼RNA-AK004418對(duì)成肌細(xì)胞增殖和分化的影響.pdf

1、長非編碼RNA(lncRNA)是轉(zhuǎn)錄本長度大于200核苷酸不編碼蛋白質(zhì)的RNA。本研究基于本實(shí)驗(yàn)室前期基因芯片結(jié)果，篩選出在肌肉組織中高表達(dá)的lncRNA-AK004418，以小鼠C2C12細(xì)胞為研究材料，利用RNA干涉和超表達(dá)技術(shù)研究了lncRNA-AK004418對(duì)成肌細(xì)胞增殖和分化的影響。主要的研究結(jié)果如下:
　　1.利用RACE技術(shù)獲得了AK004418的全長序列，該lncRNA位于編碼基因SYNPO2第4內(nèi)含子區(qū)域，且無

2、蛋白編碼能力;AK004418在腿肌、背最長肌和舌中高表達(dá)，而SYNPO2在所研究的13種組織中均有表達(dá);在成肌細(xì)胞分化過程中，AK004418表達(dá)量逐漸上升，而SYNPO2在細(xì)胞分化5天表達(dá)量最高;核質(zhì)定位結(jié)果表明AK004418分布在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。
　　2.利用實(shí)時(shí)定量PCR、Western Blot、RTCA xCELLigence系統(tǒng)和細(xì)胞免疫熒光技術(shù)在成肌細(xì)胞中研究了干涉和超表達(dá)AK004418后對(duì)SYNPO2基因表

3、達(dá)、成肌細(xì)胞增殖與分化的影響。研究結(jié)果表明AK004418促進(jìn)了成肌細(xì)胞增殖，抑制了成肌細(xì)胞分化及其標(biāo)志基因MyHC和MyoG的表達(dá)，但對(duì)SYNPO2基因表達(dá)無顯著影響。
　　3.利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)了AK004418干涉前后的基因表達(dá)變化，結(jié)果表明干涉AK004418后上調(diào)差異表達(dá)的基因有1357個(gè)，下調(diào)差異表達(dá)的基因有1837個(gè)，上調(diào)差異表達(dá)基因主要與心肌疾病等信號(hào)通路相關(guān)，下調(diào)差異表達(dá)基因主要與細(xì)胞周期、機(jī)動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)