基因工程菌培養(yǎng)若干重要問題的研究.pdf

1、該論文以基因工程菌培養(yǎng)生產(chǎn)人表皮生長因子和青霉素?；笧檠芯繉?duì)象,針對(duì)基因工程菌培養(yǎng)中具有共性的若干關(guān)鍵問題:質(zhì)粒穩(wěn)定性、代謝副產(chǎn)物的抑制作用及高密度培養(yǎng)中的氧傳遞等,研究采用適當(dāng)?shù)墓こ檀胧?提高產(chǎn)物的表達(dá)水平.主要的研究內(nèi)容和成果包括:一、大孔樹脂在hEGF重組菌培養(yǎng)過程中的原位吸附分離乙酸乙酸是基因工程大腸桿菌培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的主要代謝副產(chǎn)物之一,對(duì)菌體生長和產(chǎn)物表達(dá)具有嚴(yán)重的抑制作用.二、固定化基因工程菌在新型三相流化床生物反應(yīng)器中

2、培養(yǎng)生產(chǎn)hEGF根據(jù)基因工程菌固定化后能提高質(zhì)粒穩(wěn)定性和細(xì)胞密度的特點(diǎn),采用新型固定化載體聚氨酯泡沫(PUF),進(jìn)行重組菌EcoiJM101的吸附固定化,這種固定化方法具有可在反應(yīng)器內(nèi)就地進(jìn)行、方法簡單、成本低廉、傳質(zhì)阻力小等優(yōu)點(diǎn).三、重組菌B. subtilis φ105MU331發(fā)酵生產(chǎn)PGA的研究重組茵B(yǎng). subtilis φ105MU331屬于PGA基因整合型并通過溫度誘導(dǎo)表達(dá)的基因工程菌.首先,優(yōu)化了生長條件,包括氮源種類、

3、碳源種類、培養(yǎng)溫度及初始pH等.四、透明顫菌血紅蛋白整合菌的培養(yǎng)特性，根據(jù)透明顫茵血紅蛋白基因(vgb)的序列,合成了一對(duì)特異性引物,以PCR方法擴(kuò)增后,將vgb基因同源整合到Escherichia coli BL21染色體上,命名為E.coliBV.研究了不同價(jià)態(tài)鐵離子對(duì)透明顫菌血紅蛋白表達(dá)的影響,0.02 mmol·L<'-1>的二價(jià)鐵離子對(duì)VHb表達(dá)和E. coliBV菌體細(xì)胞生長具有明顯促進(jìn)作用,而三價(jià)鐵離子的加入對(duì)vgb整合菌