電針與手針四關(guān)穴對CUMS大鼠腦內(nèi)谷氨酸代謝的影響.pdf

1、目的:
　　通過觀察電針及手針四關(guān)穴對慢性不可預(yù)見性溫和刺激致郁大鼠行為學(xué)及腦內(nèi)谷氨酸代謝功能的影響，對比兩種針刺方法改善CUMS大鼠抑郁行為的效應(yīng)差異，并探討其內(nèi)在機制。本文以下分為四個實驗：
　　實驗一電針與手針四關(guān)穴改善CUMS大鼠行為的效應(yīng)比較
　　方法:
　　1.動物分組
　　雄性SD大鼠60只，體重220-270g，隨機分為5組:空白組、模型組、電針組、手針組、藥物組，每組12只。
　　2

2、.干預(yù)措施
　　空白組3只/籠，正常飼養(yǎng)。模型組、電針組、手針組與藥物組采用慢性不可預(yù)見性溫和刺激聯(lián)合孤養(yǎng)方法建立抑郁大鼠模型（選擇7種不同溫和刺激，每日施加一種刺激，連續(xù)施加35日）。行為學(xué)結(jié)果提示造模成功后開始治療，治療期間各組大鼠進行相同程度的捉抓與束縛。
　　(1)模型組:建模成功后不予其他干預(yù)。
　　(2)電針組:建模成功后第二日予電針四關(guān)穴，連續(xù)波，頻率2Hz，留針30min，強度以見大鼠肢體微微顫抖而未嘶

3、叫為度;治療第一周每日一次，治療第二、第三周每兩日一次。
　　(3)手針組:建模成功后第二日予針刺四關(guān)穴，施捻轉(zhuǎn)行針法，平補平瀉，每10min行針1次，每次捻轉(zhuǎn)10s，留針30min;療程同電針組。
　　(4)藥物組:造模成功第二日予利魯唑灌胃治療(4mg/kg，i.p)，每12h灌胃一次，連續(xù)治療3周。
　　3.行為學(xué)評價指標
　　在造模前、造模3周結(jié)束時及造模5周結(jié)束時對各組大鼠進行體質(zhì)量、糖水偏好率、曠場實

4、驗及Morris水迷宮實驗檢測，以評價造模成功與否;在治療1周結(jié)束時及治療3周結(jié)束時對各組大鼠進行上述行為學(xué)檢測，評價電針、手針與西藥的治療效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1.電針、手針與利魯唑?qū)UMS大鼠體質(zhì)量的影響
　　CUMS造模5周后，與空白組比較，各造模組體重顯著下降(P＜0.05);治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組體重顯著增加（P=0.022，P=0.004，P＜0.001）;西藥組與手針組療效相

5、當，電針組與西藥組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.019)。
　　2.電針、手針與利魯唑?qū)UMS大鼠糖水偏好的影響
　　CUMS造模5周后，與空白組比較，各造模組糖水偏好率顯著降低(P＜0.05);治療3.周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組糖水偏好率顯著升高（均為P＜0.001）;各組療效比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3.電針、手針與利魯唑?qū)UMS大鼠曠場實驗評分的影響
　　實驗二電針與手針四關(guān)穴

6、改善CUMS大鼠腦內(nèi)As功能的效應(yīng)比較
　　方法:
　　1.動物分組與處理同實驗一
　　2.評價指標
　　采用Westernblot技術(shù)與Q-PCR技術(shù)觀察治療結(jié)束時各組大鼠海馬與前額葉皮層星形膠質(zhì)細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)及其mRNA表達量的變化。
　　3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計同實驗一
　　結(jié)果:
　　1.海馬腦區(qū)GFAP與GFAPmRNA表達量
　　①GFAP含量:與空白組比較，模型組

7、GFAP含量降低（P=0.002）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GFAP含量明顯升高（P=-0.003，P=0.007，P=0.003）;電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05）。
　?、贕FAPmRNA表達量:與空白組比較，模型組GFAPmRNA表達量降低（P＜0.001);與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GFAPmRNA表達量明顯升高（P=0.003，P=0.011，P=0.001）;電針組、手針組與

8、西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2.前額葉皮層腦區(qū)GFAP與mRNA表達量
　?、貵FAP含量:與空白組比較，模型組GFAP含量降低（P=0.001）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GFAP含量明顯升高（P=0.019，P=0.004，P=0.001）;電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　②GFAPmRNA表達量:與空白組比較，模型組GFAPmRNA表達量降低（P=0.00

9、6）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GFAPmRNA表達量均有升高，電針組、西藥組有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.016，P=0.061，P=0.017）;電針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　實驗三電針與手針四關(guān)穴改善CUMS大鼠腦內(nèi)GS功能的效應(yīng)比較
　　方法:
　　1.動物分組與處理同實驗一
　　2.評價指標
　　采用Westernblot技術(shù)與Q-PCR技術(shù)觀察治療后各組大鼠海馬與前額葉

10、皮層內(nèi)谷氨酰胺酶(GS)及其mRNA表達量的變化。
　　3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計同實驗一
　　結(jié)果:
　　1.海馬腦區(qū)GS及其mRNA表達量
　?、貵S含量:與空白組比較，模型組GS含量降低（P＜0.001);與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GS含量明顯升高（均為P＜0.001);電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　?、贕SmRNA表達量:與空白組比較，模型組GSmRNA表達量降低（P

11、=0.018）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GSmRNA表達量均有升高，電針組與西藥組有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.019，P=0.036，P=0.007）;電針組、與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.前額葉皮層腦區(qū)GS及其mRNA表達量
　?、貵S含量:與空白組比較，模型組6S含量降低（P=0.002）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GS含量明顯升高（P=0.032，P=0.015，P=0.001）;

12、電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　?、贕SmRNA表達量:與空白組比較，模型組GSmRNA表達量降低（P=0.006）;與模型組比較，電針組、手針組與西藥組GSmRNA表達量均有升高，電針組與西藥組有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.018，P=0.015，P＜0.001）;電針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05）。
　　實驗四基于1H-[13C]-NMR比較電針與手針四關(guān)穴對CUMS大鼠腦內(nèi)谷氨酸代謝的影

13、響
　　方法:
　　1.動物分組與處理同實驗一
　　2.評價指標
　　采用1H-[13C]-NMR技術(shù)觀察治療后各組大鼠海馬與前額葉皮層內(nèi)經(jīng)星形膠質(zhì)細胞代謝產(chǎn)生的谷氨酸(Glu-C4)、谷氨酰胺(Gln-C4)及γ-氨基丁酸(GABA-C2)含量的變化。
　　3.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計同實驗一
　　結(jié)果：
　　(1)海馬谷氨酸-C4、谷氨酰胺-C4及γ-氨基丁酸-C2的富集量
　　谷氨酸-C4:C

14、UMS造模5周后，與空白組比較，模型組富集量顯著下降（P=0.034）;治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組富集量有上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　谷氨酰胺-C4:CUMS造模5周后，與空白組比較，模型組富集量顯著下降（P=0.034）;治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組富集量有上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05）。
　　γ-氨基丁酸-C2:CUMS造模5周后，與空白組比較，模型

15、組富集量顯著降低（P＜0.001);治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組富集量明顯上調(diào)（P=0.001，P＜0.001);手針組優(yōu)于電針組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.015），與西藥組療效相當（P＞0.05）。
　　(2)前額葉皮層谷氨酸-C4、谷氨酰胺-C4及γ-氨基丁酸-C2的富集量
　　谷氨酸-C4:CUMS造模5周后，與空白組比較，模型組富集量顯著下降（P＜0.001）;治療3周后，與模型組比較，電針組、

16、手針組與西藥組富集量有顯著回升（P=0.002，P=0.001，P=0.002），電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　谷氨酰胺-C4:CUMS造模5周后，與空白組比較，模型組富集量顯著降低（P=0.001）;治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組富集量顯著升高（P=0.019，P=0.007，P=0.001）;電針組、手針組與西藥組比較無統(tǒng)計學(xué)差異P＞0.05)。
　　γ-氨基丁酸-C2:

17、CUMS造模5周后，與空白組比較，模型組富集量顯著降低（P=0.034）;治療3周后，與模型組比較，電針組、手針組與西藥組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　電針與手針四關(guān)穴可改善CUMS大鼠體重降低、糖水偏好率下降、活動能力減退等抑郁樣行為，與利魯唑相當;其中手針四關(guān)穴在改善自主活動及探索行為方面有優(yōu)于電針與利魯唑的趨勢。
　　電針與手針四關(guān)穴可提高CUMS大鼠海馬及前額葉皮層的GFAP、GS、谷氨酸