費氏中華根瘤菌nifR3-ntrBC基因突變株的構(gòu)建及其特性.pdf

1、生物固氮作用對于環(huán)境及世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)而言極為重要，而在各種生物固氮作用中，根瘤菌與豆科植物的共生固氮是最為重要的一種。費氏中華根瘤菌(以下簡稱S.fredii)HN01是一株快生型大豆根瘤菌，相比大豆慢生根瘤菌而言，快生型大豆根瘤菌更適合作商業(yè)化生產(chǎn)的菌劑。因為它生長快，胞外多糖少。 本研究的目的是克隆nifR3-ntrBC基因，分別構(gòu)建其基因突變株，研究這些基因?qū)Y(jié)瘤、固氮和生長的影響，從而揭示nifR3-ntrBC基因在共生過

2、程中的可能作用。 本研究利用轉(zhuǎn)座子Tn5gusA5對重組質(zhì)粒pGXHN300進行誘變，通過插入位點的分析，獲得Tn5gusA5插入到ntrB基因的重組質(zhì)粒pGXHN305。通過測序，獲得nifR3-ntrBC基因的全序列。利用pK18mob分別構(gòu)建nifR3、ntrB、ntrC基因的突變質(zhì)粒，經(jīng)三親本接合導(dǎo)入HN01，獲得突變菌株GXHNR、GXHNB、GXHNC。將pGXHN300亞克隆，獲得互補質(zhì)粒pGXHN306，它包含有

3、完整的nifR3-ntrBC基因?；パa質(zhì)粒pGXHN306通過三親本接合導(dǎo)入突變體，獲得互補菌株GXHNHRGXHNHB、GXHNHC。 通過對HN01、突變體、互補菌株進行生長影響的測試，發(fā)現(xiàn)都能正常生長在以硝酸鹽為唯一氮源的培養(yǎng)基上。但以銨鹽為唯一氮源時，突變體不能正常生長，而HN01和互補菌株能正常生長在以銨鹽為唯一氮源的培養(yǎng)基上。通過植株試驗，發(fā)現(xiàn)GXHNR不能結(jié)瘤，GXHNB、GXHNC在結(jié)瘤時間、固氮酶活性和結(jié)瘤效率