貴州建蘭亞屬植物的親緣關(guān)系研究.pdf

1、蘭花在我國(guó)有近2000年的栽培歷史，是園藝花卉中的重要栽培植物，作為被子植物的最大科之一，全世界約有800屬近17500種，而我國(guó)就有蘭科植物173屬1247種以上，蘭花資源非常豐富。蘭花不僅具有高的觀賞價(jià)值、藥用價(jià)值還能帶來(lái)很好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，因此，很多學(xué)者開(kāi)展了對(duì)中國(guó)蘭花的種質(zhì)資源調(diào)查、引種馴化、遺傳多樣性分析等研究工作，但由于蘭科植物的特殊性，相關(guān)國(guó)蘭研究受到很多局限，造成大部分稀有野生蘭花資源不斷流失。目前，開(kāi)展我國(guó)蘭花種質(zhì)資源調(diào)查

2、，利用組織培養(yǎng)、細(xì)胞、生化、分子等研究方法弄清其形態(tài)學(xué)、生物學(xué)和遺傳特征迫在眉睫。為此，作者用RAPD(ERAPD)，ISSR，葉綠體和線粒體基因組DNA PCR-RFLP三種分子標(biāo)記對(duì)我國(guó)貴州產(chǎn)區(qū)蘭屬建蘭亞屬的7個(gè)種共21個(gè)品種進(jìn)行了分子鑒定和親緣關(guān)系研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴用RAPD標(biāo)記對(duì)21個(gè)貴州建蘭亞屬品種進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)40個(gè)10bp隨機(jī)引物中的28個(gè)能揭示材料間的多態(tài)性，共產(chǎn)生了142條帶，其中128為

3、多態(tài)性條帶(90.14％)。篩選多態(tài)性好，條帶清晰的RAPD引物BO319，在其3'端添加A,T,C,G四個(gè)堿基，并用這4個(gè)添加了堿基的引物組合成10對(duì)ERAPD引物，其中的8對(duì)有效引物可產(chǎn)生比RAPD更特異的譜帶，其余2種組合擴(kuò)增效率明顯下降。8個(gè)ERAPD引物在21個(gè)材料間共擴(kuò)增出了26條譜帶，其中15條具有多態(tài)性(57.69)，在所有材料間均可見(jiàn)一條2.5Kb的譜帶，猜測(cè)其可能與控制蘭花某種重要性狀的基因有關(guān)。用全部168條帶統(tǒng)計(jì)

4、21個(gè)蘭花品種的遺傳相似系數(shù)，并做聚類分析。2種分子標(biāo)記在遺傳相似系數(shù)0.537的水平上，將供試品種劃分成了A,B,C三組。結(jié)果表明，在春蘭組中春劍和蓮瓣蘭親緣關(guān)系較近，建蘭組中，墨蘭和寒蘭親緣關(guān)系較近。
　　 ⑵18對(duì)ISSR引物中的8對(duì)可以在21個(gè)貴州國(guó)蘭建蘭亞屬品種間產(chǎn)生品種間差異明顯的譜帶，共擴(kuò)增出了78條帶，其中42條為多態(tài)性條帶(53.85％)。統(tǒng)計(jì)材料間遺傳相似系數(shù)在0.613～0.862，GS最大的是的春蘭的2個(gè)

5、品種。聚類分析結(jié)果表明，21個(gè)品種被清晰的劃分為春蘭組和建蘭組，其中春蘭組下又在較大遺傳相似系數(shù)水平下，分為A1和A2兩組，蓮瓣蘭首先與春蘭遺傳相似系數(shù)最高，表明其親緣關(guān)系最近。
　　 ⑶選用6個(gè)葉綠體和4個(gè)線粒體植物細(xì)胞質(zhì)通用引物，以所有材料基因組DNA進(jìn)行篩選。結(jié)果4個(gè)葉綠體引物和2個(gè)線粒體引物可擴(kuò)增出穩(wěn)定而清晰的產(chǎn)物。用8個(gè)限制性內(nèi)切酶(HinfⅠ、RsaⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅡ、BamHⅠ、HpaⅠ、PstⅠ、XhoⅠ

6、)對(duì)標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行消化。4個(gè)有效cpDNA的PCR-RFLP標(biāo)記/酶組合中，有12種cpDNA的標(biāo)記/酶組合共檢測(cè)到了47條帶，其中39條呈多態(tài)性(82.98％)。2個(gè)有效mtDNA的PCR-RFLP標(biāo)記/酶組合中，有7種標(biāo)記/酶組合共檢測(cè)到了27條，其中多態(tài)性條帶23條(85.19％)。用所有74條帶計(jì)算供試材料間的遺傳相似系數(shù)并做聚類圖，GS位于0.625-0.925之間。聚類結(jié)果顯示，21個(gè)建蘭亞屬品種被分成了A,B,C三組。