我國石斛屬植物種質(zhì)資源及其親緣關(guān)系研究.pdf

1、石斛屬(Dendrobium)植物是蘭科的附生植物，它是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，除了具有較高的藥用價值外，它還具有較高的觀賞價值?，F(xiàn)在廣泛栽培的石斛蘭是以石斛屬植物的原生種為親本進(jìn)行雜交選育出的優(yōu)良觀花品種。我國有豐富的石斛屬植物資源，但觀賞石斛的育種比較落后。針對這一問題，本研究進(jìn)行了我國石斛屬植物的種質(zhì)資源及其親緣關(guān)系的研究，以期為我國的觀賞石斛蘭育種奠定基礎(chǔ)。 本研究調(diào)查研究了我國石斛屬植物資源現(xiàn)狀及其保護(hù)措施，并從思茅、景

2、洪和深圳等地收集引種石斛屬植物31種1變種，并對其觀賞特性進(jìn)行綜合評價。采用石斛葉綠體DNAtrnL-trnF 間隔區(qū)序列比較和采用ISSR分子標(biāo)記對我國的部分石斛屬植物資源進(jìn)行親緣關(guān)系分析，主要研究結(jié)果如下： 調(diào)查收集并引種栽培了31個石斛原生種和1個變種，引種的石斛資源栽培于中國林業(yè)科學(xué)研究院科研溫室。 首次運(yùn)用模糊數(shù)學(xué)的方法對所收集的石斛資源進(jìn)行觀賞特性綜合評價。將32個石斛樣本依據(jù)觀賞特性劃分為優(yōu)、良、中、差4個

3、等級。綜合觀賞特性優(yōu)的有7種石斛；良的有14種石斛和1個變種；中等的有8種石斛；差的有2種石斛。 對利用CTAB法從以下幾種石斛(鐵皮石斛、石斛、細(xì)莖石斛、齒瓣石斛、喉紅石斛、黑毛石斛、翅梗石斛)的幼嫩葉片提取DNA的方法進(jìn)行了改進(jìn)，用改進(jìn)后的方法提取的DNA數(shù)量多，質(zhì)量好，純度高。 首次利用石斛屬植物的葉綠體DNA trnL-trnF 間隔區(qū)序列分析研究石斛屬植物種間的親緣關(guān)系。所測的30個石斛樣本的葉綠體DNA tr

4、nL-trnF 間隔區(qū)序列已登錄GenBank。 所測序列用CLUSTAL軟件進(jìn)行序列分析，分析了石斛種間的親緣關(guān)系，總體上將30個石斛樣本劃分為4個相對獨(dú)立的大組。 石斛葉綠體DNA trnL-trnF 間隔區(qū)序列分析確定出的石斛屬植物部分種間的親緣關(guān)系為：報春石斛和兜唇石斛親緣關(guān)系較近；串珠石斛與大苞鞘石斛親緣關(guān)系較近：黑毛石斛與長距石斛和喉紅石斛親緣關(guān)系較近；刀葉石斛與劍葉石斛親緣關(guān)系較近；這與中國植物志石斛屬形態(tài)

5、分類相一致。而翅梗石斛與小黃花石斛親緣關(guān)系較近；鼓槌石斛與短棒石斛親緣關(guān)系較近；石斛與重唇石斛親緣關(guān)系較近這與中國植物志的石斛屬形態(tài)分類不一致。首次從60條ISSR引物中篩選出5條引物用于石斛屬植物ISSR-PCR擴(kuò)增。這5條引物擴(kuò)增的條帶清晰、多態(tài)性好，32個石斛樣本共擴(kuò)增出103個清晰、穩(wěn)定的條帶，其中有93個多態(tài)性條帶，多態(tài)性條帶百分率為90.2％，擴(kuò)增的條帶長度在200—2000bp之間。建立了穩(wěn)定的、可重復(fù)的石斛屬植物ISSR

6、．PCR反應(yīng)體系，為今后利用ISSR 標(biāo)記技術(shù)開展石斛種間親緣關(guān)系的研究提供一個標(biāo)準(zhǔn)化程序。 根據(jù)ISSR擴(kuò)增結(jié)果，用Ntsys(2.0)軟件計(jì)算出遺傳相似系數(shù)和遺傳距離，按UPGMA方法構(gòu)建聚類樹狀圖，32個石斛樣本可分為4組。 利用ISSR分子標(biāo)記確定出的石斛屬植物部分種間的親緣關(guān)系為：細(xì)莖石斛與鐵皮石斛和滇桂石斛親緣關(guān)系較近；流蘇石斛與疊鞘石斛親緣關(guān)系較近；喉紅石斛與黑毛石斛和長距石斛親緣關(guān)系較近；刀葉石斛與劍葉石