建蘭亞屬植物種質資源分子分類及親緣關系研究.pdf

1、為了加快蘭花的育種步伐,培育出優(yōu)質的蘭花品種。本文對建蘭亞屬蘭花種質資源的形態(tài)及葉綠素含量進行比較分析,并利用RAPD、ERPAD、PCR-RFLP、ISSR、SRAP分子標記技術對建蘭亞屬植物資源進行分子分類及親緣關系研究。
　　 主要研究結果如下:
　　 1.對建蘭亞屬21個蘭花品種的形態(tài)特征的觀察和分析可以看出,除葉脈序特征均為平行脈序(弧形脈),葉片均為紙質外,不同品種間的一級與二級脈隨品種也不相同,所有品種在形

2、態(tài)上具一定的分化,表明其形態(tài)特征反映出不同品種間的相似性和差異性,從而為屬下種間的界限和關系的探討提供了重要的形態(tài)學證據(jù)。
　　 2.應用SPAD-502葉綠素計和常規(guī)方法對21個建蘭亞屬蘭花品種的葉綠素含量進行了比較分析。結果表明:大多數(shù)蘭花在種間或種內的葉綠素a、葉綠素b、總葉綠素含量以及SPAD值均有所不同,但他們之間表現(xiàn)出優(yōu)異的差異性；7個蘭花種間的葉綠素含量與其SPAD值的相關性均達到了顯著水平,表明利用SPAD值米衡

3、量其葉綠素含量的可行性；通過聚類分析可以把21個蘭花品種分為2大類群。
　　 3.應用ERPAD(延長隨機引物擴增DNA)標記對54個寒蘭品種進行分析和鑒定。結果表明:8個多態(tài)性強引物的1個堿基延長,共擴增出2959條帶,其中2527條帶(85.40％)具有多態(tài)性,延長2個堿基引物ACTGAACGCCCG+ACTGAACGCCGG能獲得一條2.5Kb RAPD特異性片段,此片段在RAPD引物(ACTGAACGC)和延長一個堿基的

4、(ACTGAACGCC+ACTGAACGCCC)引物具有相同的擴增片段。在無需克隆和測序的條件下,這種標記的穩(wěn)定性和特異性均接近SCAR標記。通過聚類分析可以把54個寒蘭品種分為2大類群。
　　 4.應用PCR-RFLP標記對54個寒蘭品種的葉綠體和線粒體基因組進行分析和鑒定。結果表明:在6個葉綠體基因組(cpDNA)的PCR-RFLP分析中,對4個(66.67％)可擴增出條帶引物進行12種限制性內切酶消化,有19種(26.38

5、％)引物酶組合能檢測到116多態(tài)性帶紋。在6個線粒體基因組中(mtDNA)的PCR-RFLP分析中,利用12種限制性內切酶對能擴增出條帶的2種引物進行消化后,只有一種引物(Cox1)能擴增出55(53.49％)多態(tài)性帶紋。通過聚類分析可以把54個寒蘭品種分為4大類群。
　　 5.應用ISSR標記對54個寒蘭品種進行分析和鑒定。結果表明:8個ISSR引物共擴增出893條帶,每對引物擴增條帶數(shù)為2-6條,平均為3.22。其中有224

6、個多態(tài)性條帶,占總帶數(shù)的24.72％,平均多態(tài)性條帶數(shù)為2.73。擴增帶紋片段多在200bp-2000bp之間。通過聚類分析可以把21個蘭花品種分為6大類群。
　　 6.應用 SRAP標記對51個寒蘭品種的基因組DNA進行分析。結果表明篩選出的11對SRAP引物組合對共擴增出586條帶紋,其中504條為多態(tài)性(86.01％),平均每個引物擴增46條多態(tài)性帶。聚類分析表明把51份材料根據(jù)起源和生物學特性劃分為中國寒蘭和日本寒蘭兩大