3A與3B表位串聯(lián)抗原的口蹄疫鑒別診斷ELISA的研究.pdf

1、口蹄疫（Foot and Mouth Disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV)引起的以感染偶蹄獸為主的急性、熱性、高度接觸傳染性疫病。該病的發(fā)生嚴重地限制易感動物的國際貿(mào)易，近幾年我國局部口蹄疫疫情嚴重，給畜牧業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失。因此，防控和監(jiān)測口蹄疫疫情由為重要，如何快速鑒別自然感染與疫苗免疫動物是防控口蹄疫的重要部分。
　　 本研究對本實驗室篩選鑒定出的1

2、株Asial型口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3A上的2個B細胞線性表位進行加工修飾成一條短肽，之后與非結(jié)構(gòu)蛋白3B上的一段合成短肽進行反復(fù)串聯(lián)，并在大腸桿菌中表達出5種不同的重組蛋白，表達的重組蛋白經(jīng)SDS-PAGE和Western blot分析證明，這5種蛋白都可以與口蹄陽性血清反應(yīng)，從中選出1個抗原性最強的目的蛋白做Western blot分析證實，此抗原可以與3種口蹄疫血清型牛陽性血清發(fā)生良好的特異性反應(yīng)，并將其作為包被抗原，建立一種間接E

3、LISA檢測方法來對?？谔阋卟《痉墙Y(jié)構(gòu)蛋白抗體進行檢測來區(qū)別自然感染牛和疫苗免疫牛。
　　 使用本ELISA方法檢測了184份已知陰性牛血清，以“陰性血清對照均值+3SD”作為臨界值判定標準，即S/P＞0.31為陽性，并設(shè)定了可疑區(qū)間:陰性血清對照均值+2SD〈可疑區(qū)間〈陰性血清對照均值+3SD即:0.23≤S/P≤0.31;S/P＜0.23為陰性。用建立的方法檢測40份已知口蹄疫陽性血清，檢出率為100％，說明本方法的敏感性為

4、100％;對常見的4種牛病陽性血清進行特異性交叉試驗，檢測結(jié)果表明該ELISA檢測方法不4種陽性血清發(fā)生反應(yīng)，具有較好的特異性，同時重復(fù)性試驗的批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10％。通過比較發(fā)現(xiàn)本ELISA與Ceditest(r)競爭ELISA試劑盒的符合率最高為96.25％;與蘭獸研3ABC間接ELISA試劑盒次之，為93.48％;與世紀元亨阻斷ELISA的符合率為84.35％，最低。利用本方法對不同地區(qū)的5個奶牛養(yǎng)殖場的829份血清樣本進

5、行檢測，陽性率從8.02％到47.75％不等。r3AB-ELISA的建立可用于口蹄疫的鑒別診斷，為FMD的綜合防控提供了技術(shù)支持和物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 本研究以血清學(xué)ELISA的(2BF2AF)2抗原作為檢測抗原為基礎(chǔ)建立了檢測奶液的奶液間接ELISA方法，并確立了臨界值標準:S/P≥0.2為陽性，S/P≤0.2為陰性。以蘭獸研3ABC間接ELISA試劑盒檢測血清為參考標準，用奶液ELISA檢測對應(yīng)奶液，符合率為86.36％，利用本