雙親短肽自組裝-共組裝構(gòu)筑超分子納米纖維人工水解酶.pdf

1、本論文以雙親短肽Fmoc-FFH、Fmoc-FFS和Fmoc-FFD為基本組裝單元，通過(guò)自組裝和共組裝制備得到呈納米纖維結(jié)構(gòu)的超分子人工水解酶。以對(duì)硝基苯酚乙酸酯為底物，考察了人工水解酶的催化活性、動(dòng)力學(xué)行為和酶學(xué)性質(zhì)，并對(duì)人工水解酶的微觀形貌和二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征分析；進(jìn)一步，結(jié)合分子印跡方法，在人工水解酶納米纖維中構(gòu)建專一性活性位點(diǎn)，大幅提高了人工水解酶的催化活性。主要結(jié)論如下：
　?。?）雙親短肽自組裝人工水解酶：利用雙親短肽

2、Fmoc-FFH的自發(fā)組裝性能，得到了自組裝人工水解酶SA-H，其微觀形貌為規(guī)則的納米纖維，并以反-折疊的方式排列；SA-H催化水解速率為2.41×10-4mM·L-1·s-1，最適催化溫度為35℃，最適催化pH為8.0，與天然水解酶具有相似的動(dòng)力學(xué)行為，Ca2+、Ba2+對(duì)SA-H的活性起到激活作用，而Mg2+、Ni2+、Co2+、Cu2+、Zn2+則抑制SA-H活性。
　?。?）雙親短肽共組裝人工水解酶：以Fmoc-FFH、F

3、moc-FFS、Fmoc-FFD為基本構(gòu)筑單元，通過(guò)共組裝將天然水解酶催化三聯(lián)體氨基酸引入納米纖維中，得到具有水解活性的共組裝人工水解酶CoA-HSD；通過(guò)優(yōu)化共組裝單體比例為40:1:1得到了高度規(guī)則的納米纖維，且水解速率達(dá)到最大；動(dòng)力學(xué)行為表明CoA-HSD具有比天然水解酶更強(qiáng)的底物結(jié)合能力和催化效率；CoA-HSD還可催化甲基丙烯酸甲酯和正丁醇發(fā)生轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，46h后產(chǎn)率達(dá)28％。
　?。?）分子印跡-共組裝人工水解酶：為了提