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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究旨在通過實(shí)驗(yàn)研究SBD(淀粉結(jié)合域)以及其串聯(lián)后的SBD(N)與淀粉親和性的變化。以黑曲霉的基因組為模板，用Pfu聚合酶對(duì)SBD基因編碼序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。并將SBD連接到pTrehisB表達(dá)載體中。然后采用同尾酶連接法得到pTrehisB/SBD(N)質(zhì)粒載體。酶切pTrehisB/SBD(N)質(zhì)粒中的SBD(N)片段并接入pET28b表達(dá)質(zhì)粒中得到pET28b/SBD(N)后，將其表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入到Rosseta宿主中，用IP
2、TG誘導(dǎo)重組蛋白質(zhì)的表達(dá)，最后通過Ni+-NTA柱來純化蛋白。 以多種碳水化合物為底物，通過非變性親和電泳來定性分析SBD(N)重組蛋白否能與水溶性碳水化合物結(jié)合，通過SDS-PAGE來檢驗(yàn)SBD(N)是否能與不溶性碳水化合物結(jié)合。最后通過等溫滴定量熱儀(ITC)來測(cè)定SBD1到SBD5與β-環(huán)糊精親和力的大小。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：SBD(N)與水溶性淀粉、β-環(huán)糊精、不溶性淀粉都有強(qiáng)的作用力。隨著SBD1到SBD5串聯(lián)個(gè)數(shù)
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