DNA條形碼試劑盒在疫霉屬和腥黑粉菌屬檢測(cè)中的應(yīng)用及風(fēng)險(xiǎn)分析.pdf

1、疫霉屬(Phytophthora sp.)和腥黑粉菌屬(Tilletia sp.)是日常檢疫工作中的重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象，疫霉屬是包括大豆、馬鈴薯等在內(nèi)多種作物的病原真菌，嚴(yán)重危害寄主植物的生長;腥黑粉菌屬主要危害小麥等禾本科作物，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文通過對(duì)這兩個(gè)屬內(nèi)較為重要的病原菌進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，旨在進(jìn)一步了解進(jìn)境植物攜帶疫霉屬和腥黑粉菌屬病原真菌的情況及其傳入風(fēng)險(xiǎn)，明確該屬下病原真菌的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)，并提出相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)管理措施，為今后更好的開展檢

2、驗(yàn)檢疫工作提供參考。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果得出，疫霉屬中有7種高風(fēng)險(xiǎn)檢疫性有害生物，分別為:栗黑水疫霉(P.cambivora)、馬鈴薯疫霉緋腐病菌(P.erythroseptica)、大豆疫霉（P.sojae）、丁香疫霉（P.syringae）、冬生疫霉（P.hibernalis）、苜蓿疫霉（P.medicaginis)、多枝疫霉（P.ramorum）;腥黑粉菌屬中有3種高風(fēng)險(xiǎn)檢疫性有害生物，分別為:小麥印度腥黑粉菌（T.indica）、小

3、麥矮腥黑粉菌（T.controversa）、黑麥草腥黑粉菌（T.walkeri）。建議在進(jìn)境植物檢疫過程中應(yīng)重點(diǎn)予以關(guān)注，特別是T.walkeri目前尚未列入我國進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄，但通過風(fēng)險(xiǎn)分析我們得出，該病原菌的進(jìn)入風(fēng)險(xiǎn)較高，定殖擴(kuò)散可能性大，且經(jīng)濟(jì)危害嚴(yán)重，因此建議將其增列為我國進(jìn)境植物檢疫性有害生物。
　　鑒于疫霉屬和腥黑粉菌屬的病原真菌存在種間形態(tài)極為類似，對(duì)檢疫人員經(jīng)驗(yàn)要求較高的特點(diǎn)，本文對(duì)上述2個(gè)屬較為重要的

4、病原種進(jìn)行了基因條碼檢測(cè)技術(shù)的研究。DNA條形碼試劑盒具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠、不依賴檢疫人員的經(jīng)驗(yàn)技術(shù)等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)近似種的有效區(qū)分。本研究中，我們嘗試將DNA條形碼試劑盒技術(shù)用于疫霉屬和腥黑粉菌屬的檢測(cè)，通過自行研發(fā)的疫霉屬DNA條形碼試劑盒（疫霉屬基因條碼檢測(cè)網(wǎng)站,http://58.211.92.14:8080/myapp）、腥黑粉菌屬DNA條形碼試劑盒（植物有害生物檢疫鑒定系統(tǒng)，http://58.211.92.14/s

5、ysinspect/kj.aspx）實(shí)現(xiàn)對(duì)這兩個(gè)屬內(nèi)病原真菌的快速、準(zhǔn)確的鑒定，有效解決對(duì)于實(shí)際工作中難以鑒定到種的問題。試劑盒以網(wǎng)站形式呈現(xiàn)，方便使用者的實(shí)際應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，疫霉屬基因條碼試劑盒主要涉及疫霉屬真菌的ITS、28S、60S、COX2四個(gè)基因片段，并相對(duì)應(yīng)有用于疫霉屬真菌DNA擴(kuò)增的引物、PCR反應(yīng)體系和條件。通過我們自行研發(fā)的分析軟件，共找到特異性堿基位點(diǎn)238個(gè)，其中ITS片段86個(gè)，分屬8個(gè)種;60S片段42個(gè)，

6、分屬13個(gè)種;28S片段44個(gè)，分屬12個(gè)種;COX2片段66個(gè)，分屬13個(gè)種。除掘氏疫霉（P.drechsleri）外，其它種均能找到不同數(shù)量的特異性堿基位點(diǎn)，可以基本實(shí)現(xiàn)對(duì)疫霉屬中重要種的有效區(qū)分和鑒定。腥黑粉菌屬DNA條形碼試劑盒由于基因序列有限，目前主要嘗試了ITS片段，通過自行研發(fā)的分析軟件，共找到67個(gè)特異性堿基位點(diǎn)，包含6個(gè)種。通過條形碼試劑盒僅可實(shí)現(xiàn)對(duì)部分種的區(qū)分，建議隨著研究的不斷發(fā)展，可以嘗試在其他基因片段上尋找更多