肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機制在支氣管肺發(fā)育不良中的作用研究.pdf

1、第一部分：高氧及TGF-β1對肺泡Ⅱ型細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
　　目的：探討高氧及TGF-β1干預(yù)小鼠肺泡Ⅱ型細胞(AECⅡ)后，是否發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及其影響。
　　方法：小鼠肺泡Ⅱ型細胞系MLE-12，隨機分為空氣暴露組、高氧暴露組、TGF-β1干預(yù)空氣暴露組、TGF-β1干預(yù)高氧暴露組。觀察各組6、12、24、48h細胞形態(tài)變化。應(yīng)用細胞免疫熒光雙標法及熒光定量PCR法檢測各組各時間點肺表面活性物質(zhì)B(SP-B

2、)及成纖維細胞特異性蛋白1(FSP1)蛋白和mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：隨著高氧及TGF-β1干預(yù)時間的延長，AECⅡ逐漸由鵝卵石樣變成紡錘體形狀，獲得成纖維細胞樣外觀。同時，AECⅡ特異性標記SP-B表達逐漸減弱，成纖維細胞特異性標記FSP1表達逐漸增強，24h時兩者時可見明顯的共表達。高氧暴露組、TGF-β1干預(yù)空氣暴露組及TGF-β1干預(yù)高氧暴露組24、48h SP-B mRNA表達較同時間空氣暴露組下調(diào)，而FSP1 m

3、RNA表達較同時間空氣暴露組上調(diào)。
　　結(jié)論：高氧及TGF-β1均能誘導AECⅡ發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，且兩者對EMT的作用具有時間依賴性。
　　第二部分：肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機制對支氣管肺發(fā)育不良纖維化影響的實驗研究
　　目的：觀察高氧暴露新生小鼠上皮細胞標記(肺表面活性物質(zhì)蛋白B，[SP-B])及成纖維細胞特異性標記(成纖維細胞特異性蛋白，[FSP1])在新生小鼠中的表達情況，探討肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-

4、Mesenchymal Transition，EMT)在支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)中的作用及機制的研究。
　　方法：新生的1d的C57BL/6小鼠隨機分為：BPD組及對照組，應(yīng)用高濃度氧暴露制作BPD小鼠模型，HE染色、放射性肺泡計數(shù)(RAC)、Masson染色、免疫熒光雙標及熒光定量PCR技術(shù)，觀察高氧暴露后3、7、14、21 d肺組織病理改變及SP-B和FSP1蛋白、mRN

5、A在BPD小鼠中隨時間變化的表達情況；BPD小鼠行肺功能檢測，評價其生理病理功能的改變。
　　結(jié)果：與對照組比較，BPD組高氧暴露后小鼠肺組織逐漸出現(xiàn)發(fā)育障礙、膠原沉積明顯；SP-B表達于21d時低于對照組(P<0.05)，而FSP1表達相應(yīng)的增強(P<0.05)，同時第14、21d SP-B及FSP1在肺組織內(nèi)出現(xiàn)共表達，而對照組相應(yīng)時間未見SP-B及FSP1共表達存在；肺功能檢測顯示BPD組與對照組相比呼吸頻率(F)及潮氣量(