生膚油促進燒傷創(chuàng)面無瘢痕修復(fù)的機制研究.pdf

1、燒傷是臨床上的常見病和多發(fā)病，受傷組織的范圍及深度決定燒傷的嚴(yán)重程度，嚴(yán)重?zé)齻颊邉?chuàng)面愈合后留有難以祛除的疤痕。生膚油（Shengfu Oil，SFO）是由黃芩、乳香等十六味藥物組成，具有化腐生肌、消炎止痛等功效，可用于治療Ⅲ度燙傷創(chuàng)面。乳香（olibanum）是生膚油中重要組分，是橄欖科植物卡氏乳香（Boswellia carteri）的樹脂，具有抗炎、抗氧化等藥理活性，對創(chuàng)面修復(fù)有潛在的藥理價值。
　　目的：
　　本課題

2、主要研究生膚油對家兔Ⅲ度燙傷創(chuàng)面皮膚的無瘢痕修復(fù)作用，并探討生膚油的抗炎鎮(zhèn)痛的療效；同時比較三種不同溶媒提取生膚油的組分之一乳香的化學(xué)成分，并探討乳香提取物及三種主要揮發(fā)油α-蒎烯、正辛醇、芳樟醇的抗炎鎮(zhèn)痛作用。為今后開展生膚油促進Ⅲ度燙傷無瘢痕修復(fù)的分子機制研究做基礎(chǔ)，并為進一步推廣生膚油在臨床的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、水蒸汽法建立家兔Ⅲ度燙傷創(chuàng)面模型，造成36只兔背部左右兩側(cè)各1處創(chuàng)面（面積為6 cm2）

3、。隨機將家兔均分為空白對照組、生膚油組、莫匹羅星組，并對創(chuàng)面相應(yīng)涂抹麻油、生膚油、莫匹羅星軟膏治療，0.15 mL/cm2，3次/天。傷后（PSD）1、7、14、43天觀察各組創(chuàng)面大體變化，并處死各組兔各3只，取部分創(chuàng)面組織 H&E染色后行組織形態(tài)學(xué)觀察；部分創(chuàng)面組織行免疫組織化學(xué)染色，采用多光譜技術(shù)定量創(chuàng)面皮膚中β-連環(huán)素（β-catenin）、跨膜蛋白Dlk1和環(huán)氧化酶2（COX-2）的表達，對數(shù)據(jù)進行雙向方差分析。
　　2、

4、采用耳廓涂抹二甲苯和足底皮內(nèi)注射福爾馬林分別制備小鼠炎性腫脹模型和足底疼痛模型，予治療組小鼠涂抹相應(yīng)藥物，于0、1、2、4、8、12 h測各組小鼠耳廓腫脹值，于0、1、4、12 h后測各組小鼠足底熱痛閾值，對數(shù)據(jù)進行雙向方差分析。
　　3、應(yīng)用氣相-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)分析不同溶媒乳香提取物揮發(fā)油的成分，內(nèi)標(biāo)法測定揮發(fā)油中α-蒎烯、正辛醇、芳樟醇的含量。采用耳廓涂抹二甲苯和足底皮內(nèi)注射福爾馬林分別制備小鼠炎性腫脹模型和足底疼

5、痛模型，予各組小鼠相應(yīng)涂抹乳香提取物和單品揮發(fā)油藥物進行治療，于0、0.15、1、2、4、8、12 h測各組小鼠耳廓腫脹值，于0、4、8、12 h后測各組小鼠足底熱痛閾值，對數(shù)據(jù)進行雙向方差分析。12 h后處死小鼠，取小鼠部分足部皮膚組織固定后行H&E染色；部分足部皮膚組織固定后行COX-2蛋白免疫組織化學(xué)染色，采用多光譜技術(shù)定量創(chuàng)面皮膚中COX-2蛋白的表達，對數(shù)據(jù)進行雙向方差分析。建立細(xì)胞劃痕實驗?zāi)Ｐ?，研究乳香油提物和生膚油對細(xì)胞傷

6、口愈合的作用。
　　結(jié)果：
　　1、生膚油具有促進創(chuàng)面快速修復(fù)的作用：①傷后1~43天，生膚油組創(chuàng)面愈合優(yōu)于其他兩組，無明顯瘢痕；②H&E染色結(jié)果顯示，生膚油組創(chuàng)面結(jié)構(gòu)完整，有新生皮膚附屬器；③免疫組織化學(xué)染色及定量結(jié)果顯示，創(chuàng)面修復(fù)早期生膚油組創(chuàng)面皮膚中β-catenin、Dlk1蛋白表達顯著高于對照組，COX-2蛋白表達顯著低于對照組；修復(fù)中期，β-catenin蛋白表達下調(diào)；修復(fù)后期，β-catenin、Dlk1大量表

7、達；④細(xì)胞劃痕試驗結(jié)果顯示，生膚油提取物促進成纖維細(xì)胞遷移。
　　2、生膚油具有抗炎鎮(zhèn)痛作用：給藥后至4 h，與模型組相比，生膚油組小鼠的耳廓腫脹度顯著降低，表明生膚油可以有效減輕二甲苯誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。在12 h時，相對于模型組，生膚油組小鼠的足底熱痛閾值明顯升高，恢復(fù)到對照組的111％，表明生膚油可以有效的抑制福爾馬林皮內(nèi)注射引發(fā)的痛覺過敏，并且其藥物作用時間持久。
　　3、生膚油的組分之一乳香具有抗炎鎮(zhèn)痛的作用：①乳香的

8、油提物中α-蒎烯、正辛醇、芳樟醇的含量分別是0.072 mg/mL、0.038 mg/mL、0.0593 mg/mL，醇提物中分別是0.0015 mg/mL、3.69 mg/mL、0.73 mg/mL；②與模型組相比，油提乳香組和醇提乳香組小鼠的耳廓腫脹度顯著降低，水提乳香組小鼠的耳廓腫脹度未見明顯減退。油提乳香組、醇提乳香組、水提乳香組小鼠的足底熱痛閾值均明顯升高。乳香油提物中正辛醇、α-蒎烯、芳樟醇和混合物對小鼠耳廓炎癥和小鼠足底痛

9、覺過敏均有抑制作用；③H&E染色結(jié)果顯示，α-蒎烯組、芳樟醇組、正辛醇組和混合物組皮下炎細(xì)胞浸潤減少，芳樟醇組和混合物組效果優(yōu)于另外兩組。免疫組織化學(xué)染色及定量結(jié)果顯示，與模型組相比，α-蒎烯組、芳樟醇組、正辛醇組和混合物組COX-2蛋白表達減少，分別減少87%、86%、73%、91%，α-蒎烯組、芳樟醇組和混合物組效果優(yōu)于正辛醇組。④細(xì)胞劃痕試驗結(jié)果顯示，乳香油提取物促進成纖維細(xì)胞遷移。
　　結(jié)論：
　　生膚油通過調(diào)節(jié)創(chuàng)面