蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)對(duì)草甘膦降解作用的初步研究.pdf

1、草甘膦是一種非選擇性的芽后莖葉除草劑,廣泛用于防除雙子葉、禾本科雜草等。近年來(lái),草甘膦由于優(yōu)良的除草效果及抗草甘膦作物的種植,在我國(guó)已得到廣泛的推廣和使用。目前,國(guó)內(nèi)草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的研究成為了熱點(diǎn),而草甘膦降解菌株為轉(zhuǎn)基因作物研究提供了微生物資源。本試驗(yàn)通過(guò)富集培養(yǎng)的方法從土壤和廢水中分離篩選出120株降解菌,對(duì)其中降解能力較強(qiáng)的CW-1菌株進(jìn)行了深入研究,主要研究結(jié)果如下:
　　 1.利用富集培養(yǎng)、馴化技術(shù)從草甘膦廢水和長(zhǎng)期

2、施用草甘膦的土壤中分離得到了120株能降解草甘膦的微生物,包括20株真菌和100株細(xì)菌。利用紫外分光光度法和高效液相色譜柱后衍生法測(cè)定了菌株對(duì)草甘膦的降解率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):真菌菌株WF-11、細(xì)菌菌株CW-1和CW-72降解草甘膦能力較強(qiáng),對(duì)草甘膦的降解率分別為52.5％、60.2%和56.3%。
　　 2.通過(guò)生物學(xué)、生理生化特征及16S rDNA序列分析的方法對(duì)CW-1菌株進(jìn)行了鑒定,結(jié)果表明CW-1菌株為蠟樣芽孢桿菌(Baci

3、llus cereus)。研究了CW-1菌株對(duì)草甘膦的降解特性,明確了CW-1菌株降解草甘膦的最適條件:草甘膦濃度1500 mg·L-1;培養(yǎng)時(shí)問(wèn)5 d;溫度30℃;pn值8.0;CW-1菌株接種量4 mL(OD600=1);葡萄糖濃度5 g·L-1。在上述適宜條件下,CW-1菌株對(duì)草甘膦的降解率為65.3%。草甘膦的耐受實(shí)驗(yàn)表明,在草甘膦培養(yǎng)基2中,草甘膦濃度在16000～32000 mg·L-1時(shí),該菌株生長(zhǎng)迅速;在草甘膦濃度為32

4、000 mg·L-1時(shí)生長(zhǎng)量達(dá)到最高;草甘膦濃度為48000mg·L-1時(shí)生長(zhǎng)緩慢。
　　 3.抗藥性實(shí)驗(yàn)表明,CW-1菌株在含有氨芐青霉素、鹽酸四環(huán)素的平板培養(yǎng)基上能生長(zhǎng);在含有卡那霉素和氯霉素的平板培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。將從CW-1菌株中擴(kuò)增得到的部分aroA基因與己報(bào)道蠟樣芽孢桿菌aroA基因進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn):CW-1的aroA基因發(fā)生了多位點(diǎn)突變。將CW-1菌株中的小質(zhì)粒和aroA基因分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌中,轉(zhuǎn)化菌株在含有48000