我國(guó)蘋果主要病毒的檢測(cè)及蘋果褪綠葉斑病毒分子變異的研究.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：我$4324公玨國(guó)蘋單位代碼：學(xué)號(hào)：100862009400果主要病毒的檢測(cè)及蘋果褪綠葉斑病毒分子變異的研究ThedetectionofmainapplevirusesandthemolecularvariabilityanalysisofApplechloroticleafspotvirusinChina學(xué)位申請(qǐng)人：冀志蕊指導(dǎo)教師：王亞南副教授曹克強(qiáng)教授學(xué)科專業(yè)：植物病理學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期

2、：二。一二年五月三十曰摘要IIIIIIIIlllllIIIIIIIILIIlY2143724節(jié)果病毒病在世界各地廣泛分布，影響，低重，具有危害性強(qiáng)、傳播擴(kuò)散快和難以治愈的特點(diǎn)。=：薩果病毒破壞和l二二擾果樹(shù)『F常生理功能，導(dǎo)致樹(shù)勢(shì)減弱，產(chǎn)量降低，果實(shí)品質(zhì)下降，造成j限重的經(jīng)濟(jì)損失。本論文針對(duì)我國(guó)四種主要蘋果病毒節(jié)果花葉病毒(ApplemosaicvirtlS，ApMV)、節(jié)果褪綠葉斑病毒(Applechloroticlec∥spotvi

3、rus，ACLSV)、節(jié)果莖痘病毒(Applestempittingvirus，ASPV)和節(jié)果莖溝病毒(Applestemgroovingvirus，ASGV)進(jìn)行研究。主要取得了以下研究結(jié)果：1建立了能夠穩(wěn)定應(yīng)用于陽(yáng)問(wèn)四種節(jié)果主要病毒檢測(cè)的RTPCR體系：確定了適合節(jié)果總RNA提取的最佳提取方法一RNA改良提取法；對(duì)用于四種病毒RTPCR檢測(cè)已發(fā)表引物和自行設(shè)計(jì)引物進(jìn)行篩選；確定了最佳引物，并對(duì)各病毒RTPCR檢測(cè)體系和程序進(jìn)行優(yōu)化

4、。優(yōu)化的RTPCR檢測(cè)體系能夠?qū)λ姆N蘋果病毒進(jìn)行周年檢測(cè)，ASPV、ASGV、ACLSV和ApMV檢測(cè)靈敏度分別為總RNA模板的2000x稀釋液、5000x稀釋液、10，000x稀釋液、200x稀釋液。2通過(guò)對(duì)我國(guó)13個(gè)省(市／區(qū))327份材料進(jìn)行檢測(cè)，明確了我國(guó)蘋果產(chǎn)區(qū)四種病毒的發(fā)生及分布：四種節(jié)果病毒病在我國(guó)蘋果產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，ApMV、ASPV、ASGV和ACLSV的平均侵染率分別為801％、651％、737％和697％。病毒混合侵

5、染現(xiàn)象普遍，兩種病毒混合侵染率為165％，三種病毒混合侵染率為511％，四種病毒混合侵染率為269％。其中ApMVASGVACLSVASPV復(fù)合侵染率最高，為269％，其次為ApMVASGVACLSV，侵染率為168％；ACLSVASPV混合侵染率最低，為03％。3建立了能夠同時(shí)檢測(cè)四種節(jié)果病毒的多重RTPCR檢測(cè)體系：利用攜帶ASPV、ASGV和ACLS、，7的組培苗及陽(yáng)問(wèn)ApMV染病組織為材料，對(duì)四種病毒的RTPCR檢測(cè)引物組合進(jìn)行

6、篩選，在此基礎(chǔ)上加入節(jié)果內(nèi)源基因引物，并對(duì)檢測(cè)體系和程序進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：引物ASGVs一5’／ASGVs一3’、2002ASPV5’／2002ASPV3’、ACLSV4—5’／ACLSV4—3’及EFla一5’／EFla一3’組合能夠同時(shí)特異性檢測(cè)四種節(jié)果病毒和節(jié)果內(nèi)源基因。ASPV、ASGV、ACLSV和ApMV檢測(cè)靈敏度分別達(dá)到2，000x、1，000x、1，000x和l00x總RNA模板稀釋液。最后通過(guò)檢測(cè)F只問(wèn)樣本明確了所建

7、立的多重RTPCR檢測(cè)體系在罔問(wèn)應(yīng)用的可能性。4初步明確了我國(guó)節(jié)果上ACLSV的分子變異情況：對(duì)來(lái)源于我國(guó)不同地域、不同品種的54個(gè)ACLSV分離物的部分CP序列進(jìn)行了測(cè)定，與已報(bào)道的66個(gè)ACLSV分離物進(jìn)行序列同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析。發(fā)現(xiàn)我國(guó)節(jié)果上ACLSV分離物處于2個(gè)不同組群，組群I包含了與己報(bào)道的“B6型”分離物親緣關(guān)系較近的38個(gè)分離物，其中20個(gè)分離物CP氨基酸變異位點(diǎn)較為特殊，在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中與己報(bào)道的“B6型”分離物