蘋果褪綠葉斑病毒外殼蛋白基因的克隆、序列分析、原核表達(dá)及抗血清的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、庫(kù)爾勒香梨是新疆名優(yōu)特產(chǎn)瓜果,因其獨(dú)特的風(fēng)味受到國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者的親睞.但近年來其外形色澤發(fā)生變化、口感降低、品質(zhì)退化,嚴(yán)重威脅這一名優(yōu)水果的生產(chǎn)和發(fā)展.據(jù)報(bào)道這種情況的發(fā)生與病毒病的發(fā)生存在一定關(guān)系,而病毒感染庫(kù)爾勒香梨后不產(chǎn)生明顯的癥狀,對(duì)早期診斷和預(yù)防造成了極大的困難.血清學(xué)方法靈敏、快速己廣泛用于大批量的病毒檢測(cè).從庫(kù)爾勒香梨分離獲得2個(gè)病毒分離物,經(jīng)鑒定為蘋果褪綠葉斑病毒(Apple chloroti cleaf spot vir

2、us,ACLSV)和蘋果莖溝病毒(Apple stem groo ving virus,ASGV).該論文在抗血清制備中,改變傳統(tǒng)的抗原提取方法,采用基因工程的方法獲得抗原,根據(jù)已報(bào)道的ACLSV不同分離物P863、P205和A-BaII的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物,通過PCR擴(kuò)增、克隆和測(cè)序,得到ACLSV庫(kù)爾勒香梨分離物外殼蛋白基因全長(zhǎng)cDNA,長(zhǎng)849bp,分析所得序列,含有一個(gè)開放閱讀框架(open readi ng frame,ORF

3、),ORF起始于56-58nt的起始密碼子AUG,終止于635-637nt的終止密碼子UAA,長(zhǎng)582bp,推測(cè)編碼一個(gè)由193個(gè)氨基酸組成,分子量約22kDa的蛋白質(zhì).與已報(bào)道的P863、P205和A-BaII的外殼蛋白基因序列分析比較,結(jié)果表明,核苷酸序列同源性分別為81.2%、86.1%和80.0%,氨基酸序列同源性分別為88.0%、89.6%和84.9%.再根據(jù)序列分析結(jié)果構(gòu)建ACLSV外殼蛋白基因原核表達(dá)載體,通過原核表達(dá)及提

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