離斷下牙槽神經(jīng)對大鼠實驗性牙周炎的影響研究.pdf

1、牙周炎是有著廣泛罹患人群的口腔疾病，是成人失牙的主要原因。牙周致病菌是牙周炎發(fā)生的始動因素，沒有牙周致病菌不會發(fā)生牙周炎，然而在牙周致病菌普遍存在、口腔衛(wèi)生狀況相似的情況下，不同個體牙周病損的發(fā)生和進(jìn)展存在很大差異，這就提示宿主因素在牙周炎的發(fā)生發(fā)展過程中同樣發(fā)揮重要作用。致病菌的存在是牙周炎發(fā)生的必要條件，宿主易感性則影響宿主在應(yīng)對細(xì)菌免疫應(yīng)答過程中的強度，從而導(dǎo)致不同程度的牙周組織破壞。牙周組織炎癥進(jìn)展及組織破壞的范圍很大程度上取決

2、于宿主對牙周致病菌及其代謝產(chǎn)物的免疫炎癥反應(yīng)。
　　神經(jīng)因素是宿主因素的重要組成部分，神經(jīng)可以通過分布在組織器官中的疼痛感受器、刺激感受器來感受疼痛、壓力，發(fā)揮感知功能。神經(jīng)也可以通過分泌神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽來調(diào)控組織損傷后的局部炎癥反應(yīng)，影響損傷組織的修復(fù)愈合。神經(jīng)因素其在牙周炎發(fā)生進(jìn)展中是否發(fā)揮重要調(diào)控作用及相關(guān)機制值得進(jìn)一步的研究證實。重度牙周病程中，牙周支持組織大量破壞，其中的神經(jīng)束亦會受累，導(dǎo)致部分病變組織區(qū)域會處于失神經(jīng)支

3、配的情況，失神經(jīng)支配后病變區(qū)的炎癥進(jìn)程如何發(fā)展，神經(jīng)及其分泌的功能性神經(jīng)肽在牙周組織炎癥進(jìn)程中發(fā)揮何種作用亟待深入研究和闡釋。失神經(jīng)支配亦是神經(jīng)支配研究的有力補充。絲線誘導(dǎo)的大鼠實驗性牙周炎在牙周炎研究中應(yīng)用廣泛。單純使用絲線或者正畸結(jié)扎絲結(jié)扎誘導(dǎo)的牙周炎一般需要較長的試驗周期才能觀察到明顯牙槽骨吸收。絲線配合牙周致病菌則能夠更快的觀察到牙周炎癥和骨質(zhì)吸收的發(fā)生，但是細(xì)菌的培養(yǎng)或購買又會增加實驗成本和操作的難度，不同批次給藥又會存在一致

4、性問題。我們使用縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹正畸結(jié)扎絲改良結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠牙周炎模型。
　　本研究建立離斷下牙槽神經(jīng)的失神經(jīng)支配和結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠牙周炎的聯(lián)合模型。觀察失下牙槽神經(jīng)支配對大鼠牙周炎的發(fā)生、進(jìn)展的影響，并探討其可能機制。
　　方法:
　　將縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹4-0正畸結(jié)扎絲，分離牙齦之后牢固結(jié)扎于下頜第一磨牙牙頸部誘導(dǎo)大鼠實驗性牙周炎同時離斷同側(cè)下牙槽神經(jīng)。選擇成年雄性Wistar大鼠，隨機分為4組:絲線加鋼絲結(jié)扎

5、組(L)，單純離斷神經(jīng)組(D)，絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)，正常鼠(N)作為對照(n=8)。絲線加鋼絲結(jié)扎組(L)和絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠行側(cè)下頜第一磨牙絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)實驗性牙周炎;單純離斷神經(jīng)組(D)和絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的大鼠同時行右側(cè)下牙槽神經(jīng)離斷術(shù)。術(shù)后4周取材，分離下頜骨行Micro-CT檢查，定量評價牙槽骨吸收情況，分析骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁

6、厚度(trabecular thickness)，骨小梁數(shù)量(trabecular number)，骨礦化密度(bone mineral density)等骨生物學(xué)參數(shù)。10％EDTA脫鈣后制備石蠟切片，組織學(xué)觀察牙周組織破壞情況;TRAP染色觀察破骨細(xì)胞并計數(shù);天狼星紅染色觀察牙齦組織膠原纖維的走向和破壞情況。分離新鮮下頜第一磨牙的牙齦組織，放射免疫法檢測牙齦組織中IL-1β、TNF-α、OPG和sRANKL表達(dá)，計算OPG/sRAN

7、KL比例;提取牙齦組織核蛋白Western bloting檢測NF-κ B p65和Iκ Bα磷酸化。
　　結(jié)果:
　　使用縫合絲線嚴(yán)密纏繞包裹4-0正畸結(jié)扎絲，實驗周期內(nèi)可以牢固結(jié)扎于下頜第一磨牙牙頸部，在術(shù)后4周即可誘發(fā)牙齦組織的炎癥和牙槽骨的少量吸收。離斷下牙槽神經(jīng)可以顯著加重結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠實驗性牙周炎。絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)下頜第一磨牙的牙槽骨吸收顯著高于絲線加鋼絲結(jié)扎組。離斷神經(jīng)組和正常組均未觀察到牙槽

8、骨的吸收。
　　Micro-CT分析骨特異性參數(shù)顯示:絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)的骨組織面積百分比(percent bone area)、骨小梁厚度(trabecular thickness)，骨礦化密度(bone mineral density)，較絲線結(jié)扎組均顯著降低。
　　絲線加鋼絲結(jié)扎+離斷神經(jīng)組(LD)中TRAP染色陽性細(xì)胞顯著增加，牙齦組織中IL-1β and TNF-α的表達(dá)顯著增加，膠原纖維破壞更加明

9、顯。機制研究發(fā)現(xiàn)，離斷下牙槽神經(jīng)可以加劇絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)的NF-κ B p65和IκBα的磷酸化，并下調(diào)OPG/sRANKL比值。單純離斷下牙槽神經(jīng)組較正常組亦可以觀察到下調(diào)的OPG/sRANKL比值。
　　結(jié)論:
　　離斷下槽神經(jīng)神經(jīng)顯著加劇結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠實驗性牙周炎。NF-κB信號通路和OPG/RANKL通路均參與這一過程。
　　大鼠離斷下牙槽神經(jīng)和絲線加鋼絲結(jié)扎誘導(dǎo)牙周炎的聯(lián)合實驗?zāi)Ｐ?，可以提供一個良好的實驗平