胞質(zhì)雄性不育新基因T1243在大白菜中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、目前在大白菜雜交育種實(shí)踐中，雄性不育材料非常少，本研究旨在將從莖瘤芥(B.juncea var.tumida Tsen et Lee)胞質(zhì)雄性不育系中克隆獲得的T1243基因整合到大白菜基因組中。首先構(gòu)建含有莖瘤芥的細(xì)胞質(zhì)雄性不育新基因T1243的植物表達(dá)載體XF003-T1243;建立大白菜的離體再生體系;并對(duì)大白菜的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行優(yōu)化，成功獲得轉(zhuǎn)基因植株。豐富大白菜不育系的育種材料，為細(xì)胞質(zhì)雄性不育機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。
　　

2、 本試驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下:
　　 1、大白菜再生體系的建立:以山西地區(qū)廣泛栽培的5個(gè)大白菜品種為材料，帶柄子葉為外植體，通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)研究了品種、NAA、6-BA、AgNO3等因素對(duì)大白菜離體再生的影響。結(jié)果顯示:品種津育75在培養(yǎng)基MS+2mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+7mg/LAgNO3的條件下再生率最高，達(dá)76.92％。
　　 2、植物表達(dá)載體XF003-T1243的構(gòu)建:分別酶切從莖瘤芥中擴(kuò)增獲得

3、的T1243和表達(dá)載體XF003，然后進(jìn)行連接，構(gòu)建了細(xì)胞質(zhì)雄性不育線粒體基因T1243的植物表達(dá)載體XF003-T1243，通過PCR和酶切鑒定XF003-T1243載體構(gòu)建正確，并導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404。
　　 3、大白菜的遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化:以大白菜帶柄子葉為外植體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，優(yōu)化大白菜的遺傳轉(zhuǎn)化體系，得出結(jié)論:津育75的最佳篩選培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+7.0mg/LAgNO3