棉花胞質(zhì)雄性不育恢復基因的精細定位和物理作圖.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學博士學位論文棉花胞質(zhì)雄性不育恢復基因的精細定位和物理作圖姓名：殷劍美申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：張?zhí)煺?0050801博士學位論文棉花胞質(zhì)雄性不育恢復基因的精細定位和物理作圖其插入片段大小，片段平均為130kb，大小范圍從80kb到275kb，957％的片段大于100kb。按棉花基因組大小為2250Mb來算，此丈庫相當于57倍棉花基因組大小。隨機取4個BAC單克隆，構(gòu)建其O代和100代的NotI和Hindl

2、II的酶切指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)帶型并沒有變化，說明單克隆的穩(wěn)定性至少保持100代。此文庫的構(gòu)建為圖位克隆筋等基因及棉花基因組學研究奠定了基礎。將此文庫按列進行混合克隆，即構(gòu)建一級混合克隆文庫，在此基礎上再按列進行混合，得到二級混合克隆文庫，它們分別含有16個和256個單克隆。利用與觚緊密連鎖的分子標記對二級混合克隆文庫進行PCR篩選，篩選到陽性混合克隆后j再對一級混合克隆庫進行篩選，最終得到陽性單克隆。共13個標記，篩選到50個陽性單克隆，其

3、中8個單克隆為2個標記所共有，平均每個標記篩選到38個陽性單克隆。對所篩選到的陽性單克隆進行了NotI和HindIII酶切，得出其大小范圍為80～225kb，平均大小為120kb。根據(jù)所有單克隆的HindIII酶切指紋圖譜，采用Image310b和FPCV72軟件對HindIII酶切圖譜進行分析，當參數(shù)tolerance值為10，cutoff為1e10時，構(gòu)建了尺力基因的物理圖譜并將其初步定位于兩個克隆(Y48和Y42)之間約100kb

4、左右的區(qū)段上。對陽性單克隆的末端進行測序，共得到38個末端序列，根據(jù)序列設計了35對引物，通過篩選親本和作圖群體，得到2個新的分子標記與恢復基因緊密連鎖。育性基因的分離克隆一直是人們關心的課題，它將對于認識不育性機理，揭示生命現(xiàn)象以及更有效地利用雜種優(yōu)勢都有著十分重要的意義。本研究首先構(gòu)建一個棉花胞質(zhì)雄性不育恢復系材料的細菌人工染色體(BAC)文庫，同時篩選與螄緊密連鎖的分子標記，構(gòu)建恢復基因緊密連鎖的遺傳圖譜，從而進行CMS恢復基因物